Xirmada PCR-da Tooska ah ee Unugyada Xayawaanka (la'aanteed Qalabka Muunalada) Hab-maamuuska
Sharaxaada
Xirmadani waxay isticmaashaa nidaam u gaar ah si ay si dhakhso ah u sii daayaan DNA-ga genomic ee shaybaarada unugyada xoolaha ee falcelinta PCR, sidaa darteed waxay si gaar ah ugu habboon tahay baaritaanka hidde-sideyaasha baaxadda leh.
Habka looga sii daayo DNA-da genomic ee kaydiyaha lysis waxa lagu dhammeeyaa 10-30 daqiiqo gudahood 65°C.Looma baahna habab kale sida borotiinka iyo ka saarista RNA, DNA-da raadraaca ee la sii daayayna waxaa loo isticmaali karaa qaab-dhismeedka falcelinta PCR.
2× PCR FududTMIsku-darku waxa uu dulqaad xooggan u leeyahay hor-joogayaasha falcelinta PCR, waxayna isticmaali kartaa lysate-ka muunadda si loogu tijaabiyo qaab-dhismeedka si hufan oo gaar ah.Dib-u-kicinta waxay ka kooban tahay Foregene D-Taq DNAPolymerase, dNTPs, MgCl2, celiyaha falcelinta, PCR optimizer iyo stabilizer.
D-Taq DNA polymerase waa DNA polymerase si gaar ah u soo saaray Foregene ee falcelinta PCR tooska ah.D-Taq DNA polymerase waxay leedahay dulqaad xoog leh oo loogu talagalay xakameynta falcelinta PCR ee kala duwan, waxayna si wax ku ool ah u kordhin kartaa tirada DNA-da ee hababka falcelinta kakan ee kala duwan, iyo xawaaruhu wuxuu gaari karaa 2Kb/min, kaas oo si gaar ah ugu habboon falcelinta PCR tooska ah.
Tilmaamaha
50×20µl rxns, 200×20µl rxns, 500×20µl rxns, 2000×20µl rxns
Qaybaha kitka
Qaybta I | Buffer AL |
Kahortagga Protease | |
6× DNA Loading Buffer | |
Qaybta II | 2× PCR FududTMIsku qas |
Tilmaamaha & faa'iidooyinka
■Ma jiro waqti-qaadasho iyo nadiifin DNA qaali ah
■ Baahida muunada waa yar tahay, in yar oo 5mg unug xayawaan ah ayaa la tijaabin karaa.
■ Looma baahna daaweyn gaar ah sida shiidi iyo burburin, qalliinkuna waa sahlan yahay.
■ Nidaamka PCR ee la hagaajiyay wuxuu ka dhigayaa PCR inay yeeshaan gaar gaar ah oo adag iyo dulqaad xooggan ee ka hortagga falcelinta PCR.
Xuduudaha Kit
Codsiga: noocyo kala duwan oo unugyo xayawaan ah.
DNA-da laga sii daayay muunada lysis: kaliya waxaa loo adeegsaday qaab PCR.
Qalabka waxaa loo isticmaali karaa ujeedooyinka soo socda: aqoonsiga transgenosis, genotyping xayawaanka, iwm.
Socodka shaqada
Kaydinta iyo nolosha shelf
Qaybta I ee xirmadan waa in lagu kaydiyaa 2-8℃.
Reagent Buffer AL waxa lagu kaydin karaa 12 bilood xaaladaha qalalan;waxa lagu kaydin karaa 2-8℃kaydinta dheer.
Reagent Foregene Protease wuxuu leeyahay qaacido gaar ah.Si loo hubiyo dhaqdhaqaaqeeda iyo xasiloonideeda, fadlan ku kaydi 4℃muddo 12 bilood ah.
Reagent 6×Kaydinta DNA-da waxa lagu kaydin karaa 4℃ama -20℃muddo dheer.
Qaybta II ee xirmadan waa in lagu kaydiyaa -20℃.
Reagent 2×PCR FududTMIsku darka waxaa lagu kaydin karaa 12 bilood at -20℃;haddii si joogto ah loo isticmaalo, waxa kale oo lagu kaydin karaa 4℃kaydinta muddada gaaban (ku isticmaal ilaa 10 maalmood gudahood).