RNase waa kelmad xasaasi ah oo arday badan oo inta badan sameeya tijaabooyinka soo saarista RNA aysan rabin inay maqlaan.Isaga oo si buuxda u hubaysan, RNA-gii ugu dambayntii laga soo saaray reagents-ka aadka u sunta ah ee phenol iyo chloroform waa la xaalufiyay.La igama heshiin!!!Maanta, aynu eegno asalka Rnase caanka ah.

Ribonuclease (RNase), ama RNase, waa nuclease ka dhigi kara RNA molecules yaryar.RNase, sida borotiinka molecule yar, ayaa si aan caadi ahayn u deggan .Heerkulka caadiga ah ee caadiga ah iyo jeermiska uumiga cadaadiska sarreeya iyo kuwa xannibaya borotiinka gabi ahaanba ma dhaqaajin karaan.Xasiloonida RNase waxay inta badan ka timaadaa curaarta disulfide ee qaabka.Tusaale ahaan, RNase-ka caadiga ah ee beeryarada lo'da ee sida caadiga ah loo isticmaalo waxa uu leeyahay 124 amino acids, laakiin waxa ku jira 4 curaarta disulfide.Dammaanadda Sulfur iyo bond disulfide waxay ku siisay RNase xasilloonida kulaylka oo aad u wanaagsan.Intaa waxaa dheer, rnase waxay leedahay miisaan yar oo unugyo ah waxayna si dhakhso ah u soo celin kartaa qaabkeeda asalka ah marar badan.

Marka laga soo tago in ay aad u deggan tahay,RNases ayaa meel walba ku yaal shaybaarka .RNase waa habka difaaca nafleyda.Unug ahaan, RNA kabaxsan inta badan waa dilaa.Marka la barbar dhigo DNA-ga dibadda ah, RNA exogenous badanaa waa ka khatar badan tahay.RNA si farxad leh ayaa loo qorey oo loo turjumay, markaa ku dhawaad ​​dhammaan noolaha ayaa horumariyey RNases si ay uga difaacaan duulaanka RNA-ga dibadda ah.Sidaa darteed, unugyada bakteeriyada ee lagu beeray shaybaarka iyo adiga oo soo saara RNA waxa ay soo saaraan udgoonka RNase.Dheecaannada jidhka bini'aadamka (candhuufta, ilmada, iwm.) waxaa ku jira xaddi badan oo RNase ah, markaa ha ooyin marka RNA ay hoos u dhacdo.Inta aad oohinayso, waxaa sii xumaanaya hoos u dhaca RNA!!Walaasha Daiyu kuma habboona soo saarista RNA!

Intaa waxa dheer, maqaarkaaga jilicsan waxa kale oo uu ka kooban yahay RNase badan, calaamadeeyayaasha, tuubooyinka, albaabbada qaboojiyaha, iyo gacan-qabsiga albaabada ee uu taabtay maqaarku waxa kale oo ku jira RNase.

Iyada oo aad u badan, aan eegno sida loola macaamilo RNases.

Waxa ugu horreeya ee qof kastaa ka fikiro marka la saarayo RNA waaDEPC(dietyl pyrocarbonate).DEPC inta badan waxay denatures borotiinka iyadoo la isku daraa imidazole giraanta ee kooxda RNase histidine firfircoon, oo markaas joojinaya dhaqdhaqaaqa enzyme.0.1% DEPC waxay saameyn wanaagsan ku yeelan kartaa saarista Rnase, laakiin waxaan u baahanahay inaan fiiro gaar ah u yeelano in DEPC ay tahay kansar la yaqaan, sidaas darteed taxadar gaar ah waa in la bixiyaa marka la isticmaalayo.

RNase, waxaan u baahanahay inaan ka bilowno laba dhinac,marka hore waa in la joojiyo dhaqdhaqaaqa RNase endogenous

Dib-u-soo-saareyaasha RNA-ga caadiga ah sida guanidine isothiocyanate iyo DTT ee ku jira Trizol waxay furi karaan dammaanadda disulfide-ka ee RNase, laakiin weli waxaa jira qaar RNases ah, gaar ahaan shaybaarrada unugyada, markaa fiiro gaar ah uyeel heerkulka hooseeya.

1.Isla markiiba muunadda nudaha ku dhex geli nitrogen dareere ah ka dib markaad soo saarto, ama xalka ilaalinta RNA ganacsi.

2.Ka dib marka la soo saaro RNA ee muunada unugga, ku dar xalalka lysis oo ku dul mari sanduuqa barafka

3. Waxaa fiican inaad u isticmaasho nitrogen dareere ah si aad wax u shiido marka shaybaarada unuggu isku mid noqdaan.Markaad isticmaasho homogenizer koronto oo aan lahayn nitrogen dareere ah, fiiro gaar ah u yeelo inaad si buuxda u qaboojiso adabtarada homogenate.

Midda labaad waa DNA-ga dibadda ah

1.Hubi inaad si buuxda u hubaysan, xidho jaakad shaybaadhka, xidho maaskaro, oo iska hubi inaad xidhato laba-gacmo-gashiyo cusub (ha noqon mid aad u adag!! Waa in la ogaadaa in Trizol uu yahay mid daxal badan, sidoo kalena uu aad ugu xoogan yahay galoofyada, markaa gacmahaaga ha ku daadan).

2.Dhammaan talooyinka pipette ee la isticmaalo, tuubooyinka EP, tuubooyinka PCR iyo qalabka kale waa in laga daaweeyaa RNase.Waxaa lagu qooyay 0.1% DEPC ka dibna lagu cadaadiyo cadaadis sare.U fiirso qalliinka ku jira daboolka qiiqa.Daalimiinta maxalliga ahi waxay si toos ah u iibsan karaan alaabada ay ka saarayaan enzymes-ka.

PS: Aan kuu sheego hab caajis ah.Inkastoo heerkulka sare iyo cadaadiska sare aysan si buuxda uga saari karin RNase, waxay ka saari doontaa qayb weyn oo ka mid ah.2 jeer heerkulka sare iyo cadaadiska sare ayaa leh saameyn wanaagsan, soo saarista RNA waxay leedahay saameyn yar.

3.Khamrigu wuxuu diidaa borotiinnada,markaa miiska soo saarista RNA waxaa lagu tirtiri karaa 75% aalkolo , iyo galoofyada sidoo kale waxaa lagu buufin karaa aalkolo.

4.Xalka RNA ugu dambeeya ee kala dirida iyo tuubada centrifuge waa in sidoo kale laga daaweeyaa RNase.Biyaha DEPC waa RNA kala diris caadi ah oo la isticmaalo.Aynu ka hadalno habka saxda ah ee diyaarinta biyaha DEPC (xusuusnow inaad dib u baakadayso DEPC-ga ganacsiga markaad iibsanayso)

Ku dar DEPC biyaha ultrapure at 1:1000, si fiican u rux, u daa istaag habeen dhan 37°C, oo nadiifi 121°C hoos heerkulka sare iyo cadaadis sare 15 daqiiqo.Biyaha DEPC waxa lagu kaydin karaa -20°C 1ml oo aliquots ah.

Ugu dambeyntii, si aan u soo koobo: heerkulka hoose waa furaha, alaabta la isticmaalo si fiican ayaa loo maareeyaa, hub buuxa iyo hadal yar!

Hagaag, taasi waa tan istiraatiijiyada maanta.Waxaan kuu rajeynayaa dhammaan xoojinta RNA iyo nadiifnimada aad sheegtay.Labada A260/A280 waa 2.0!!!

Dabcan, haddii aad isticmaasho aXirmada soo saarista heerkulka qolka, waxaa laga yaabaa inaadan la kulmin dhibaatooyinka kor ku xusan.

Hawlgalka heerkulka qolka, iyada oo aan lagu darin DNA-da, waxay ka soo saartaa wadarta guud ee RNA unugyada 11 daqiiqo, waxayna ka soo saartaa wadarta RNA ee unugyada xayawaanka ama dhirta 30 daqiiqo.

Tijaabada tijaabada, fadlan la xidhiidh:overseas@foregene.com

Alaabooyinka La Xiriira:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/