Hogaamin

RNA aan codayn dheer, lncRNA waa RNA aan codayn oo dhererkiisu ka weyn yahay 200 nucleotide, guud ahaan inta u dhaxaysa 200-100000 nt.lncRNA waxay xakameysaa muujinta hidda-wadaha ee epigenetic, transcription iyo post-transcriptional, waxayna ka qaybqaadataa aamusnaanta chromosome X, daabacaadda genome iyo wax ka beddelka chromatin, firfircoonida qoraalka, faragelinta qoraalka, gaadiidka nukliyeerka, nidaaminta wareegga unugyada, kala-soocidda unugyada unugyada, iyo ka-hortagga qiyaasta magdhowga cudurrada kale ee laxiriira, iyo hababka kale ee ka hortagga magdhowga cudurada. oo hadda waa mid ka mid ah meelaha kulul ee berrinka bioomedicine.

01  Noocyada iyo sifooyinka LncRNA

lncRNA waxay u qaybsantaa noocyo badan iyadoo loo eegayo ilaha kala duwan ee samayntiisa, sida ku cad shaxanka sare.Leh sifooyinka soo socda:

1. lncRNAs inta badan way dheer yihiin, oo leh odhaah firfircoon iyo habab kala duwan oo kala duwan inta lagu jiro kala soocida
2. Marka la barbar dhigo hidda-sidaha codaynta, lncRNA waxay caadi ahaan leedahay heer hadal hoose
3. Inta badan lncRNAs waxay leeyihiin muuqaal ku meel gaar ah iyo meel bannaan oo cad oo ku saabsan habka kala soocidda unugyada iyo horumarka
4. Waxaa jira tilmaamo lagu garto burooyinka iyo cudurrada kale
5. Goobaha unugyada hoose ee lncRNA way kala duwan yihiin
6. Tixdu way ku yar tahay ilaalinta, laakiin shaqadu waxay leedahay ilaalin gaar ah, iwm.

02 Su'aalaha inta badan la isweydiiyo ee ku saabsan qoraalka LncRNA

Sababtoo ah maadada hoose ee lncRNA ee unugyada, dhererka dheer iyo qaab dhismeedka heerka sare ah, RNA noocan oo kale ah waxay inta badan leedahay dhismayaal kakan sida siddooyinka stem ama biinanka timaha, iyo RT-qPCR waxay u nugul yahiin dhibaatooyinka dib u dhigista aan lagu guuleysan ama waxtarka hooseeya.

03 LncRNA beddelka qoraalka qoraalka

Xeerka dhexe, habka fayrasyada RNA ee isticmaalaya transcriptase iyaga u gaar ah si ay u abuuraan DNA iyaga oo isticmaalaya RNA qaab ahaan waxaa loo yaqaannaa qoraal dib u noqosho.Habka loo isticmaalo fayraska RNA transcriptase reverse in synthesize cDNA template in vitro waxaa loo yaqaan qoraal-ku-noqosho.Waxyaabaha ugu muhiimsan ee lagu soo daray nidaamka qoraalka gadaal: RNA template, transcriptase gadaal, curiye iyo qaybo kale.

1.RNA template

Saamaynta template RNA ee qoraalka gadaasha waxa ay ka muuqataa qaab dhismeedkeeda, daahirnimadeeda iyo daacadnimadeeda.Marka ay sare u kacdo daahirnimada iyo hufnaanta RNA-ga la soo saaray, waa ay saraysaa waxtarka qoraalka gadaasha iyo sida saxda ah ee natiijooyinka tirada xiga ee xiga.RNA-da lagu sifeeyay dib-u-soo-saarista RNA ee sida caadiga ah loo isticmaalo waxay inta badan ka kooban tahay hadhaaga aalkolada iyo cusbada guanidine, kuwaas oo saameyn xoog leh ku leh transcriptase badankooda.

2.Reverse transcriptase

Dib-u-dejinta qoraalka ayaa saameyn muhiim ah ku leh dhammaan nidaamka qoraalka qoraalka.Heerkulka ku habboon qoraalka qoraalka ah ee loo isticmaalo shaybaarada intooda badan guud ahaan waa 42°C.Dhab ahaantii, furitaanka qaabka sare ee RNA wuxuu u baahan yahay heerkul sare, iyo shuruudaha qoraalka qoraalka ah ayaa sarreeya.

3.Hordhac

Qorayaasha dib-u-celinta waxaa ka mid ah aasaasayaasha hidda-sidaha u gaarka ah, aasaasayaasha random-ka iyo aasaasayaasha Oligo dT.Inta badan lncRNAs kuma jiraan dabo polyA, waxaana muhiim ah in si sax ah loo waafajiyo aasaasayaasha random ee Oligo dT.

4.Qaybaha kale

Marka la eego xaqiiqda ah in RNA ay si gaar ah u fududahay in la naaqusiyo, soo bandhigida qaybaha nidaamka qoraalka gadaasha waa la yareeyn karaa, taas oo si wax ku ool ah uga hortagi karta gelitaanka RNase oo hubin karta horumarka siman ee qoraalka gadaasha.

Foregenelaga helay qaab-dhismeedka RNA, u rogida qoraalka qPCR

Si dhammaystiran u gal ogaanshahaaga lncRNA

Wadarta Xoolaha RNA IkalinimoKit (oo leh tiirka saarista gDNA)

Wadarta unugyada RNA IkalinimoKit (oo leh tiirka saarista gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (oo leh gDNase)

Waqtiga dhabta ah PCR EasyTM-SYBR Cagaaran I

Afaa'iido darrada ofSoo saarista RNA:

Xirmada waxa ay isticmaashaa tignoolajiyada soo saarista jiilka saddexaad ee RNA, looma baahna in la isticmaalo DNA-ga.

11 daqiiqo laga bilaabo 96, 24, 12, iyo 6-unug saxan si fiican u dhaqma, soo saarista waxtarka sare leh ee gDNA-free, daahir sare, tayada sare leh wadarta unugyada RNA.

Faa'iidooyinka qoraalka lncRNA roga:

Nidaam qoraal ah oo si gaar ah loogu sameeyay LncRNA si dhakhso ah looga saaro wasakheynta DNA-ga.

Nidaamka qoraalka gadaasha waxa uu leeyahay degganaansho kulayl sare welina waxa uu leeyahay wax qabad wanaagsan oo qoraal ah oo ah 50°C.

Qaababka leh maadada GC sare iyo qaabdhismeedka sare ee adag ayaa lagu rogi karaa hufnaan sare.

Faa'iidooyinkaof qPCR:

Bilawga kulul ee Foregene Taq Polymerase waxa uu leeyahay hufnaan sare-u-qaadis, dareen-weyneyn sare, iyo gaar-weyneyn sare

Isku-dhafka dhabta ah ee PCR-ga ee la hagaajiyay wuxuu ka dhigayaa SYBR Green Waxaan leeyahay dareen-helid sare, iyo xooggiisa fluorescence waa 3-5 jeer ka alaabta la midka ah, kaas oo buuxin kara baahiyaha noocyada kala duwan ee tijaabooyinka tirooyinka fluorescence.