PCR waa tignoolajiyada kor u qaadida aashitada nucleic-ka ee ugu isticmaalka badan waxaana si weyn loo isticmaalaa dareenkeeda iyo gaar ahaaneed awgeed.Si kastaba ha ahaatee, PCR waxay u baahan tahay diidmo kulayl oo soo noqnoqda mana ka takhalusi karto xaddidaadaha ku tiirsanaanta qalabka iyo qalabka, taas oo xaddidaysa codsigeeda baaritaanka goobta caafimaadka.

Laga soo bilaabo horraantii 1990-meeyadii, shaybaarro badan ayaa bilaabay inay horumariyaan tignoolajiyada xoojinta heerkulka joogtada ah oo aan u baahnayn denaturation kulaylka.Hadda waxay soo saareen tignoolajiyada kor u qaadida loop-dhexdhexaadinta isothermal-ka, tignoolajiyada kordhinta strand beddelka isothermal, tignoolajiyada cod-weyneysiinta goobada wareegta, iyo ku-tiirsanaanta isku xigxiga aashitada nucleic.Tignoolajiyada kor u qaadida Isothermal iyo tignoolajiyada kale. 

Loop-dhexdhexaadin ah oo-weyneyn isothermal

Mabda'a kordhinta waxay ku saleysan tahay xaqiiqda ah in DNA-da ay ku jirto xaalad dheellitiran oo firfircoon qiyaastii 65 ° C.Marka aasaasiyaal kasta la isku xidho oo lagu kordhiyo qaybta dhammaystirka ah ee DNA-da laba-geesoodka ah, xadhigga kale wuu kala go'i doonaa oo noqonayaa mid-kaliya.

Heerkulkan, DNA-da waxay isticmaashaa 4 aasaasiyaal gaar ah si ay ugu tiirsato qulqulka-barakaca DNA-ga polymerase si ay isku-dubbada barokaca DNA-da si joogto ah isu-wareegto.

Marka hore go'aami 6-da gobol ee gaarka ah F3, F2, F1, B1, B2, B3 hidda-wadaha bartilmaameedka ah, ka dibna u qaabee 4 curiye oo ku salaysan 6-da gobol ee gaarka ah (sida ku cad shaxanka hoose):

Farsameeyaha hore ee gudaha (FIP) wuxuu ka kooban yahay F1c iyo F2.

Qurxinta hore ee gudaha (BIP) waxay ka kooban tahay B1c iyo B2, iyo TTTT waxa loo isticmaalaa meel bannaan oo dhexda ah.

Aasaaska sare ee F3 iyo B3 siday u kala horreeyaan waxay ka kooban yihiin gobollada F3 iyo B3 ee hidde-sidaha la beegsanayo.

Nidaamka falcelinta LAMP, xoogga saarista asaasiga gudaha ayaa dhowr jeer ka badan kan dibadda.Furaha gudaha ayaa marka hore lagu daraa strand template si loo sameeyo xadhig dhammaystiran si loo sameeyo xadhig labanlaab ah oo DNA ah.Ka dib, furaha dibadda ayaa lagu daraa xadhigga template si loo sameeyo xadhig labanlaab ah oo DNA ah.Iyada oo la raacayo ficilka BstDNA polymerase, xargaha dhammaystirka ah ee ay ku soo kordhisay curiyaha gudaha ayaa la sii daayaa.falcelin taxane ah ka dib, xadhiga dhamaystirka ah ayaa ugu danbayn samaysa hal xadhig oo DNA ah oo leh qaabdhismeed dumbbell ah.

Qaab dhismeedka dumbbell DNA hal xadhig laftiisa ayaa loo isticmaalaa qaab tusaale ah si uu si joogto ah u sameeyo qaab dhismeedka stem-loop DNA oo ku meel gaadh ah oo leh dhamaad furan.Qurxinta gudaha iyo dibadda waxay hagayaan qaab dhismeedka DNA-ga ku-meel-gaadhka ah si ay si joogto ah u maraan barokaca xadhigga iyo falcelinta fidinta, ugu dambayntiina waxay sameeyaan dhismayaal loop-badan oo dhererkoodu kala duwan yahay.Isku dhafka DNA.

Faa'iidooyinka iyo faa'iido darrada xoojinta loop-dhexdhexaadinta isothermal

Faa'iidooyinka LAMP:

(1) Hufnaanta sare-u-qaadista, kaas oo si wax ku ool ah u kordhin kara 1-10 nuqul oo hiddo-wadaha bartilmaameedka ah 1h gudahood, iyo waxtarka kordhintu waa 10-100 jeer ka PCR caadiga ah.

(2) Waqtiga falcelinta waa gaaban yahay, gaar ahaan waa mid xooggan, oo qalab gaar ah looma baahna.

Cilladaha laambadda:

(1) Shuruudaha aasaasiga ah ayaa si gaar ah u sarreeya.

(2) Alaabta la xoojiyay looma isticmaali karo cloning iyo isku xigxiga, laakiin waxa kaliya loo isticmaali karaa xukun.

(3) Dareenkeeda xooggan awgeed, way fududahay in la sameeyo aerosols, taasoo keenta natiijooyin been abuur ah oo saameeya natiijooyinka baaritaanka.

Skordhinta barakaca

Kordhinta baro-kaca Strand (SDA) waa farsamo-weyneyn DNA-ga isothermal ee ku salaysan falcelinta enzymatic markii ugu horreysay ee uu soo jeediyay aqoonyahan Mareykan ah Walker 1992-kii.

Nidaamka aasaasiga ah ee SDA waxaa ka mid ah xannibaadda endonuclease, DNA polymerase oo leh hawlo barokac ah, laba lammaane oo asal ah, dNTPs, iyo calcium iyo ion magnesium iyo hababka kaydinta.

Mabda'a baro-kaca strand balaadhinta waxay ku salaysan tahay isku xigxiga xaddidaadda aqoonsiga endonuclease kiimikaad la beddelay ee labada daraf ee DNA-da la beegsanayo.Endonuclease-ku wuxuu furay farqiga u dhexeeya DNA-da strand goobta aqoonsiga, iyo polymerase DNA-ga wuxuu fidiyaa farqiga 3′ Dhammaadka oo beddelo xargaha DNA-da ee xiga.

Xadhkaha DNA-da ee la beddelay waxaa lagu dari karaa asal-raacyo waxaana lagu kordhin karaa laba-geesoodka DNA-ga polymerase.Nidaamkan si isdaba joog ah ayaa loo soo celiyaa, si isku xigxiga bartilmaameedka si hufan loo kordhiyo.

Faa'iidooyinka iyo faa'iido darrada farsamada kordhinta barokaca ee strand

Faa'iidooyinka SDA:

Waxtarka kor u qaadida waa sare, waqtiga falcelinta waa gaaban yahay, gaar ahaan waa mid xoogan, loomana baahna qalab gaar ah.

Cilladaha SDA:

Alaabtu maaha mid la mid ah, oo qaar ka mid ah alaabooyinka hal-xidhaale iyo laba-jibbaaran ayaa had iyo jeer lagu soo saaraa wareegga SDA, iyo dabada ayaa si lama filaan ah u dhici doonta marka la ogaado electrophoresis.

Rkor u qaadida goobada

Kordhinta wareegga wareegga (RCA) waxaa la soo jeediyay iyadoo la sawirayo habka koobiynta DNA-da ee noolaha cudur-sidaha iyadoo la rogrogayo goobada.Waxay tilmaamaysaa isticmaalka DNA-da wareeg ah ee hal-xadhigle ah sida template heerkulka joogtada ah, iyo polymerase DNA gaar ah (sida Phi29) ) Iyadoo la raacayo ficilka wareegga wareegga DNA-da si loo gaaro xoojinta hiddo-wadaha bartilmaameedka.

RCA waxaa loo qaybin karaa cod-weyneyn toosan iyo cod-weyneyn jibbaaro ah.Waxtarka RCA toosan waxay gaari kartaa 10⁵waqtiyo, iyo hufnaanta jibbaarada RCA waxay gaari kartaa 10⁹waqtiyo.

Farqi fudud, sida ku cad shaxanka hoose, kor u qaadis toosan oo keliya ayaa adeegsata 1 asal, cod-weyneysiin b waxa ay leedahay 2 aasaasiyaal.

RCA toosan waxaa sidoo kale loo yaqaan hal ra'iisul-wasaare RCA.Asal ahaan wuxuu ku xidhan yahay DNA-da wareegta ah waxaana lagu kordhiyaa ficilka DNA polymerase.Alaabtu waa xadhig keliya oo toosan oo leh tiro badan oo taxane ah oo soo noqnoqda kumanaan jeer dhererka hal wareeg.

Maadaama badeecada RCA toosan ay had iyo jeer ku xiran tahay bilowga hore, hagaajinta sahlan ee calaamaduhu waa faa'iido weyn.

Exponential RCA, oo sidoo kale loo yaqaan Hyper branched amplification HRCA (Hyper branched RCA), ee jibbaaran RCA, mid ka mid ah asaasiga ah ayaa kor u qaadaya alaabta RCA, kan labaadna wuxuu isku dhejiyaa alaabta RCA oo wuu fidiyaa, bedelkuna wuxuu horeyba ugu xiran yahay alaabta RCA.

Faa'iidooyinka iyo khasaaraha ay leedahay ballaadhinta wareegga aashitada nucleic

Faa'iidooyinka RCA:

Dareen sare, gaar gaar ah iyo hawl fudud.

Cilladaha RCA:

Dhibaatooyinka asalka ah inta lagu jiro ogaanshaha calaamadaha.Inta lagu jiro falcelinta RCA, baaritaanka qufulka ee aan wareeganeyn iyo qaabka DNA ama RNA ee baaritaanka aan xirneyn ayaa dhalin kara calaamado asal ah. 

Nkordhinta isku xigxiga ee ucleicacid

Nucleic acid-ku-saleysan-kordhinta (NASBA) waa tignoolajiyad cusub oo lagu sameeyay PCR.Waa kor-u-qaadis joogto ah iyo isothermal nucleic acid oo ay hagayaan lammaane aasaasiyaal ah oo leh taxanaha dhiirrigeliyaha T7.Tiknoolajiyadu waxay kordhin kartaa qaabka RNA ilaa 109 jeer 2 saacadood gudahood, taas oo 1000 jeer ka sareysa habka caadiga ah ee PCR oo aan u baahnayn qalab gaar ah.

Tignoolajiyadan ayaa loo adeegsaday in si degdeg ah loo ogaado cudurrada isla marka ay soo shaacbaxday, shirkado badan ayaana hadda habkan u isticmaala qalabka lagu baaro RNA.

In kasta oo kordhinta RNA ay sidoo kale isticmaali karto tignoolajiyada PCR-ga beddelka ah, NASBA waxay leedahay faa'iidooyinkeeda: waxaa lagu fulin karaa xaalado heerkul joogto ah, wayna ka xasilloon oo ka saxsan tahay tignoolajiyada PCR-ga caadiga ah.

Dareen-celinta waa 41 darajo Celsius waxayna u baahan tahay AMV (fayruus myeloblastosis avian) beddelka transcriptase, RNase H, T7 RNA polymerase iyo lammaane asal ah si loo dhammaystiro.

Habka inta badan waxaa ka mid ah:

Furaha hore waxa uu ka kooban yahay isku xigxiga is kaaba ee dhiirrigeliyaha T7.Inta lagu jiro fal-celinta, hore-u-soo-qaaduhu wuxuu ku xidhaa xargaha RNA waxaana kataliya AMV enzyme si uu u sameeyo DNA-RNA double strand.

RNase H waxa ay shiiddaa RNA-da isku-dhafan ee laba-geesoodka ah oo waxa ay haysaa DNA-da hal-xidhaale leh.

Iyada oo la raacayo ficilka asaasiga ah iyo enzyme AMV, xarig labajibbaaran oo DNA ah oo ka kooban taxanaha dhiirrigeliyaha T7 ayaa la sameeyay.

Marka la eego ficilka T7 RNA polymerase, habka qoraalka waa la dhammeeyaa waxaana la soo saaraa xaddi badan oo bartilmaameed RNA ah.

Faa'iidooyinka NASBA:

(1) Asalkiisu wuxuu leeyahay taxanaha dhiirrigeliyaha T7, laakiin DNA-da laba-geesoodka ah ee ajnabiga ah ma laha taxanaha dhiirrigeliyaha T7 mana la kordhin karo, markaa tignoolajiyadani waxay leedahay gaar gaar ah iyo dareen sare.

(2) NASBA waxay si toos ah ugu daraa habka dib-u-qorista ee falcelinta xoojinta, soo gaabinaysa wakhtiga falcelinta.

Dhibaatooyinka NASBA:

(1) Qaybaha falcelinta ayaa aad u dhib badan.

(2) Saddex nooc oo ensaymes ah ayaa loo baahan yahay si falcelinta falcelinta ay sare u kacdo.