Dhawaan, waxaan helay wax cajiib ah!Qaar badan oo ka mid ah xirfadlayaasha tijaabada horumarsan ee isaga ku wareegsan xitaa ma yaqaanaan qaar ka mid ah dhibcaha aqoonta tijaabada aasaasiga ah.

Tusaale ahaan, ma ka jawaabi kartaa su'aalaha soo socda?

Ma jiraa farqi u dhexeeya OD260 iyo A260?Mid walba muxuu ula jeedaa?
OD waa soo gaabinta cufnaanta indhaha (cufnaanta indhaha), A waa soo gaabinta nuugista (nuugista), labada fikradood ayaa dhab ahaantii isku mid ah, "cufnaanta indhaha" waa "nuugista", laakiin "cufnaanta indhaha" waxay la socotaa inta badan heerarka qaranka iyo in ka badan.

Caadi ahaan waxaan ku cabbirnaa qiimaha OD ee 260nm si loo xisaabiyo xoojinta aashitada nucleic, haddaba maxay 1OD u taagan tahay?
Nucleic acid waxay leedahay nuugista ugu sarreysa ee dhererkeedu yahay 260nm, kaas oo ka kooban DNA iyo RNA labadaba, iyo sidoo kale jajabka nukleic acid jajab (tani waa barta muhiimka ah).
Qiimaha OD ee lagu qiyaasay mawjada dhererka 260 nm waxaa loo diiwaan geliyay OD260.Haddii muunadku saafi yahay, qiimaha OD260 waxa uu xisaabin karaa fiirsiga muunadda aashitada nukliyeerka.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (DNA laba-geesood ah)
= 37 μg/ml ssDNA (DNA hal-xadhig leh)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
Ma jiraa xidhiidh iyo farqi u dhexeeya RT-PCR, Realtime-PCR iyo QPCR?
RT-PCR waa mid gaaban oo loogu talagalay PCR-ga Dib-u-celinta
Waqtiga dhabta ah PCR=qPCR, oo loo soo gaabiyo tirada dhabta ah ee PCR
In kasta oo Real Time PCR (Real-time fluorescent quantitative PCR) iyo Reverse Transcription PCR (Reverse transcription PCR) labaduba waxay u muuqdaan in loo soo gaabiyo RT-PCR.Laakiin heshiiska caalamiga ahi waa: RT-PCR si gaar ah waxa loola jeedaa PCR-ga beddelka qoraalka.

Maxay yihiin kuwa sida caadiga ah loo isticmaalo nt, bp, iyo kb si loo qeexo dhererka DNA/RNA ee bayoolaji?
nt = nucleotide
bp = saldhigga lammaane saldhig
kb = kilobase

Dabcan, waxaad odhan lahayd dad badan ayaan dan ka lahayn tafaasiishan yar yar!Qof kastaa wuu sameeyaa, oo ninna kuma weydiin doono waxay tahay.Ma ogtahay in tani ay tahay mid aan loo baahnayn, sax?

Maya, Maya, Maya, waa lagama maarmaan in tan la ogaado!maxaa sababay?
Sababtoo ah waxaad rabtaa inaad maqaal ku dhejiso!Walaal!Haddi aad hiigsanayso qalin jabin ama aad raadinayso guulo cilmi baadhiseed, waa in aad ku tiirsato maqaallada aad ku hadasho!

Soo saarista aashitada nukliyeerka waa inay noqotaa tijaabada ugu fudud uguna aasaasiga ah.Tayada soo saarista nucleic acid ayaa si toos ah u go'aamisa natiijooyinka tijaabooyinka xiga.

Inkastoo aan marar badan sheegay, haddana waxaa jira saaxiibo badan oo aan dan ka lahayn.Markan waxaan go'aansaday inaan ka guuro maqaalka!

Macluumaadka Ugu Yar ee Daabacaadda Tijaabooyinka PCR-Waqtiga-Dhabta ah ee Tirooyinka, loo yaqaan MIQE, waa habraaca tijaabada tirooyinka fluorescence ee la bilaabay si caalami ah, kaas oo soo jeedinaya heerarka ugu yar ee macluumaadka tijaabada ah ee lagama maarmaanka u ah qiimeynta tijaabooyinka PCR ee fluorescence iyo daabacaadda maqaallada.Iyadoo loo marayo shuruudaha tijaabada iyo hababka falanqaynta ee uu bixiyo tijaabiyaha, dib-u-eegayaashu waxay si fiican u qiimeyn karaan ansaxnimada nidaamka tijaabada cilmi-baadhaha.

Waxaa la arki karaa in qaybta soo saarista nucleic acid, waxyaabaha soo socda ee ogaanshaha la soo jeediyay,

"E" waxay tilmaamaysaa macluumaadka ay tahay in la bixiyo iyo "D" waxay tilmaamaysaa macluumaadka ay tahay in la bixiyo haddii loo baahdo.

Foomku waa mid aad u adag, dhab ahaantii, waxaan rabaa in aan sheego in qof kastaa uu u baahan yahay inuu ka bilaabo

daahirnimo (D), wax-soo-saarka (D), daacadnimada (E) iyo joogtaynta (E) si loo qiimeeyo asiidhyada Nucleic-ka ah ee afartan dhinac.

Marka loo eego caadooyinka tijaabada ah, marka hore ka hadal hababka qiimaynta ee daahirnimada iyo feejignaanta.

Qiyaasta OD waa habka ogaanshaha ugu jecel uguna fudud ee tijaabiyaasha.Dhanka mabda'a, halkan kuma geli doono faahfaahinta.Shaybaaro badan ayaa hadda isticmaala spectrophotometers ultra-micro si ay si toos ah qiyaas ahaan u falanqeeyaan shaybaarada aashitada nukliyeerka.Iyadoo la muujinayo qiimaha nuugista, barnaamijku wuxuu si toos ah u siinayaa qiimaha xoogga leh (nucleic acid, borotiinka iyo dheeha fluorescent) iyo saamiga la xiriira.Dhanka falanqaynta qiimaha OD, Keydi sawirkan oo waad fiicnaan doontaa.

Universal OD liiska xalalka qiimaha

Si kastaba ha ahaatee, waxaa jira dhowr tilmaamood oo u baahan in si gaar ah adiga loo soo saaro.

(Dhammaan, waan ogahay inaad tahay kuwa wax kaydiya oo sug ilaa aad u baahan tahay!)

Xusuusin 1 Qalabka

Qiimaha OD waxa saamayn doona qalab kala duwan.Ilaa iyo inta OD260 ku dhex jiro xad gaar ah, qiimayaasha OD230 iyo OD280 waa macno.Tusaale ahaan, qiyaasta nuugista Eppendorf D30 ee caadiga ah ee 260nm waa 0 ~ 3A, NanoDrop Mid ka mid ah Thermona waa 260nm.Qiyaasta nuugista ee 0.5 ~ 62.5A.

Xusuusin 2Dilution reagent

Qiimaha OD waxa saamayn kara milanka reagents kala duwan.Tusaale ahaan, akhrinta OD260/280 ee RNA la safeeyey ee pH7.5 10mM Triskaydku waa inta u dhaxaysa 1.9-2.1, inta lagu jiroxal aqueous dhexdhexaad ahsaamiga ayaa noqon doona mid hooseeya, laga yaabee kaliya 1.8-2.0, laakiin tani macnaheedu maaha in tayada RNA ay isbeddelayso Farqiga.

Xusuusin 3Walxaha haraaga ah

Jiritaanka walxaha haraaga ah waxay saameyn doontaa saxnaanta cabbirka fiirsashada nucleic acid, sidaas darteed waxaa lagama maarmaan ah in laga fogaado borotiinka, phenol, polysaccharide iyo polyphenol haraaga shaybaarada nucleic acid intii suurtagal ah.

Si kastaba ha noqotee, dhab ahaantii, soo saarista reagents organic waa hab hore.Xirmooyinka ganacsiga, saamaynta soo saarista waxaa lagu gaari karaa iyada oo loo marayo tiir xayeysiis ah oo silica ku salaysan oo lagu daray centrifugation, ka fogaanshaha sunta iyo reagents organic waxyeello leh oo ay adag tahay in la saaro, iwm. Dhibaatada, sidaXirmada soo saarista aashitada nucleic ee Foregene, ma isticmaasho DNase/RNase iyo reageniyeyaasha organic sunta ah inta lagu jiro hawlgalka, dhakhso iyo badbaado leh, iyosaamayn waawanaagsan(si lama filaan ah ayaa sheegay in ay bidaar ahayd, laakiin waan ogahay in aad rabto in aad ogaato).

Tusaalaha 1: Soo saarista DNA-da genomic ee soo saarista iyo nadiifnimada

Qalabka Go'doominta Ciidda Foregene (DE-05511) wuxuu daaweeyaa muunadaha ciidda ee ilo kala duwan, iyo cadadka iyo nadiifnimada DNA-da genomic ee la helay ayaa lagu muujiyay shaxdan soo socota:
Tusaalaha 2: Soo saarista unugyada RNA ee unugyada iyo nadiifnimada

Isku geynta Xayawaanka Go'doominta RNA (RE-03012) ayaa farsameeyay muunado unugyo kala duwan, iyo cadadka iyo nadiifnimada RNA ee la helay ayaa lagu muujiyay shaxda hoose (loogu talagalay unugyada jiirka):
Si kastaba ha ahaatee, ha u malayn inaad ku dhammaatay qiimaha OD.Ma haysaa wax daryeela qodobbada muhiimka ah ee aan xagga hore kuugu sawiray?

Ogaysiis

Unugyada aashitada nucleic-ka ah ee jajaban ayaa sidoo kale lagu xisaabin doonaa nuugista.Haddii aad u malaynayso in aad leedahay hadhaagii DNA-ga ee RNA, qiimaha OD-gaagu waxa uu u muuqan doonaa mid aad u sarreeya, laakiin diiradda dhabta ah ee RNA lama go'aamin karo.Haddii RNA-gaagu yahay Ma cadda in ay jirto hoos u dhac, sidaa awgeed waxaan wali u baahanahay hab qiimayn dhamaystiran si aan u bixino xukun sax ah, taas oo ah, qiimaynta hufnaanta acid nucleic ee lagu sheegay MIQE.