PCR-da-waqtiga-dhabta ah, oo sidoo kale loo yaqaanno PCR-ga tirade ama qPCR, waa hab wakhtiga-dhabta ah ee kormeerka iyo falanqaynta alaabta PCR-weyn.
Sababtoo ah tirada PCR waxay leedahay faa'iidooyinka hawlgalka fudud, degdeg ah oo ku habboon, dareenka sare, soo celinta wanaagsan, iyo heerka faddaraynta hooseeya, waxaa si ballaaran loo isticmaalaa baaritaanka caafimaadka, qiimeynta waxtarka daroogada, cilmi-baarista hiddaha, cilmi-baarista transgenic, ogaanshaha hidda-socodka, ogaanshaha cudur-sidaha, ogaanshaha xayawaanka iyo dhirta., baaritaanka cuntada iyo beeraha kale.
Sidaa darteed, haddii aad ku hawlan tahay cilmi-baadhis aasaasi ah oo ku saabsan cilmiga nolosha, ama shaqaalaha shirkadaha dawooyinka, shirkadaha xanaanada xoolaha, shirkadaha cuntada, ama xitaa shaqaalaha kormeerka-bixitaanka iyo xafiisyada karantiilka, waaxaha la socodka deegaanka, isbitaallada iyo qaybaha kale, waxaad noqon doontaa mid aad u badan ama kayar oo aad la kulmi doonto Ama waxaad u baahan tahay inaad ogaato aqoonta maaraynta PCR-ga.

Mabaadi'da Real Time PCR

Real Time PCR waa hab lagu daro walxaha fluorescent ee nidaamka falcelinta PCR, iyo xoojinta signalka fluorescence ee habka falcelinta PCR waxaa lagu kormeeraa wakhtiga dhabta ah qalab PCR ah oo qiyaas ah, ugu dambeyntiina xogta tijaabada ah ayaa la falanqeynayaa oo laga baaraandegayaa.

【Qallooca weyneynta】waa qalooca qeexaya habka firfircoon ee PCR.Qalooca weynaynta PCR dhab ahaantii maaha qalooca jibbaarada caadiga ah, laakiin waa qalooca sigmoid.

[Wajiga madal ee qalooca cod-weyneeye]Kordhinta tirada wareegyada PCR, firfircoonida DNA-da polymerase, baabi'inta dNTP-yada iyo aasaasayaasha, iyo xakamaynta falcelinta falcelinta fal-celinta pyrophosphate-product, iwm., oo aakhirka geli doona meel dhul ah.

[Gobolka Kobaca Sarreeya ee Qalooca Amplification]Inkasta oo marxaladda dhulku si weyn u kala duwan tahay, gobol gaar ah oo ka mid ah gobolka koritaanka jibbaarada ee qalooca xoojinta, dib-u-celinta waa mid aad u wanaagsan, taas oo aad muhiim ugu ah falanqaynta tirada PCR.

[Qiimaha bilowga iyo qiimaha Ct]Waxaan dejinay qiimaha xadka ee ogaanshaha fluorescence booska ku habboon ee aagga kobaca jibbaarada ee qalooca cod-weyneysiinta, kaas oo ah qiimaha marinka (Threshold).Isgoysyada qiimaha marinka iyo qalooca cod-weyneyntu waa qiimaha Ct, taas oo ah, qiimaha Ct waxa loola jeedaa tirada wareegyada (Threshold Cycle) marka qiimaha bilowga la gaaro.

Jaantuska hoose wuxuu si cad u muujinayaa xidhiidhka ka dhexeeya xariiqda marinka iyo qalooca cod-weyneysiinta, marinka iyo qiimaha Ct.

【Sidee loo qiyaasaa?】

Waxa lagu caddeeyey aragti xisaabeed in qiimaha Ct uu leeyahay xidhiidh toosan oo rogan oo leh logarithmka tirada qaab-dhismeedka bilowga ah.Real Time PCR waxay la socotaa alaabta PCR-weynaynta wakhtiga dhabta ah waxayna qiyaastaa inta lagu jiro marxaladda cod-weyneysiinta jibbaarada.

Wareeg kasta oo PCR ah, DNA-da ayaa si aad ah u kordhay 2 jeer, oo isla markiiba waxa ay soo gaadhay meel sare.

Iyadoo loo malaynayo in cadadka DNA-da bilawga ahi yahay A₀ , ka dib n wareegyada, cadadka aragtida ee sheyga DNA waxaa loo sheegi karaa sida:

A _n =A ₀ ×2ⁿ

Dabadeed, inta ka badan qaddarka DNA-da bilowga ah A 0, sida ugu dhakhsaha badan ee qaddarka alaabada la xoojiyay u gaadho qiimaha ogaanshaha An, tirada wareegyada marka la gaadho An waa qiimaha Ct.Taasi waa, in ka badan inta qaddarka DNA ee bilowga ah A 0 yahay, marka hore ee qalooca xoojinta, iyo u dhigma tirada loo baahan yahay ee wareegyada n ayaa ka yar.

Waxaan ku fulinaa si tartiib tartiib ah u milmay heerka fiirsashada la yaqaan waxaana u isticmaalnaa qaab tusaale ahaan PCR Time-ka dhabta ah, iyo qaloocyo xoojin ah oo taxane ah ayaa la heli doonaa waqtiyo isku mid ah sida ay u kala horreeyaan bilawga qadarka DNA-ga in ka badan ilaa ka yar.Marka loo eego xidhiidhka tooska ah ee u dhexeeya qiimaha Ct iyo logarithm ee tirada habyaallada bilowga ah, a[standard curve] waa la abuuri karaa.

Iyada oo lagu beddelayo qiimaha Ct ee muunadda oo leh feejignaan aan la garanayn oo la gelinayo qalooca caadiga ah, qaddarka template bilowga ah ee muunadda oo leh feejignaan aan la garanayn ayaa la heli karaa, taas oo ah mabda'a tirada PCR ee wakhtiga dhabta ah.

Habka ogaanshaha ee waqtiga dhabta ah PCR

Waqtiga-dhabta ah PCR waxay ogaataa alaabada PCR-weyneynta iyadoo la ogaanayo xoojinta iftiinka iftiinka ee nidaamka falcelinta.

Mabda'a Habka Isku-xidhka Dheelaha Fluorescent】

Midabaynta fluorescent, sida TB Green , waxay si aan gaar ahayn ugu xidhi kartaa DNA-da laba-geesoodka ah ee nidaamyada PCR iyo fluoresce marka la xidho.

Xoogga fluorescence ee habka falcelinta ayaa si aad ah u kordhay kororka wareegyada PCR.Iyadoo la ogaanayo xoojinta fluorescence, qadarka kordhinta DNA-da ee habka falcelinta waa lala socon karaa wakhtiga dhabta ah, ka dibna qadarka qaabka bilawga ah ee muunada ayaa dib loo qiyaasi karaa.

【Mabda'a habka baaritaanka fluorescent】

baadhida fluorescentwaa isku xigxiga aashitada nukliyeerka oo leh koox fluorescent ah oo ku taal 5'dhamaadka iyo koox demisay dhamaadka 3', kaas oo si gaar ah ugu xidhi kara qaab-dhismeedka.Marka baaritaanku uu taam yahay, faleelka uu sii daayo fluorophore-ku waa ay demiyaan kooxda demisay mana awoodo fluorescence.Marka baaritaanka uu go'o, walaxda fluorescent ayaa kala go'aysa oo sii deyn doonta fluorescence.

Baaritaanka fluorescent ayaa lagu daraa xalka falcelinta PCR.Inta lagu jiro nidaamka ciribtirka, baaritaanka fluorescent wuxuu ku xirnaan doonaa booska gaarka ah ee template.Inta lagu jiro habka fidinta, 5′→3′ waxqabadka exonuclease ee ensaymka PCR wuxuu dumin karaa baaritaanka fluorescent-ka oo isku dhafan qaab-dhismeedka, iyo walaxda fluorescent ayaa kala go'a si ay u sii deyso fluorescence.Marka la ogaado xoojinta fluorescence ee baaritaanka habka falcelinta, ujeedada kormeerka qadarka kordhinta alaabta PCR waa la gaari karaa.

【Xulashada Habka Ogaanshaha Fluorescence】

Haddii loo isticmaalo in lagu kala saaro taxanaha leh homology sare oo lagu sameeyo ogaanshaha PCR multix sida falanqaynta teebaynta SNP, habka baaritaanka fluorescent waa mid aan la bedeli karin.
Tijaabooyin PCR ee kale ee Real Time, hab fudud, fudud oo jaban ayaa la isticmaali karaa

Baaris gaar ah oo xooggan, oo awood u leh PCR-ga badan

Nusqaan

Shuruudaha gaarka ah ee sare ee xoojinta;

Multix PCR lama samayn karo Baahida loo qabo in la naqshadeeyo baadhitaano gaar ah, kharash sare;

mararka qaarkood naqshadaynta baadhida way adagtahay

Alaabooyinka La Xiriira: