• facebook
  • linkin
  • youtube

Waxaan aaminsanahay in qof kastaa mar walba la kulmi doono dhibaatooyinka noocaas ah ama kuwan oo kale ah marka ay samaynayaan falcelinta PCR, laakiin intooda badan waxaa loo kala saari karaa laba dhibaato oo waaweyn:

Kordhinta qaabka hiddo-wadaha (amplification);
Kordhinta hidde-sideyaasha oo aad u badan.
Isticmaalka waxyaabaha lagu daro waa mid ka mid ah xeeladaha caadiga ah ee lagu xalliyo dhibaatooyinkan.Caadiyan doorka wax-ku-darku wuxuu leeyahay laba dhinac:
qaabdhismeedka sarehiddo-wadaha (qaab-dhismeedka labaad);
Iska yaree horudhac aan gaar ahayn.
Maanta, tafatiruhu wuxuu si kooban kuugu soo bandhigi doonaa waxyaabaha lagu daro ee ku jira falcelinta PCR iyo hawlahooda.
Waxyaalaha lagu daro ee yareeya qaabdhismeedka sare
sulfoxide(DMSO)
shaybaarka hiddasidahaoo leh maadooyin sare oo GC ah .Si kastaba ha ahaatee, DMSO waxay sidoo kale aad u yaraynaysaa dhaqdhaqaaqa Taq polymerase.Sidaa darteed, qof kastaa waa inuu isku dheelitiraa gelitaanka template iyo waxqabadka polymerase.Tifaftiruhu wuxuu soo jeedinayaa inaad isku dayi karto uruurin kala duwan oo DSMO ah, sida laga bilaabo 2% ilaa 10%, si aad u hesho fiirsashada ku habboon tijaabadaada.
Saabuunta aan ioniga ahayn
Saabuunta aan-ionic-ka ahayn, sida 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 ama NP-40, waxay inta badan yareeyaan qaabdhismeedka sare ee DNA.Inkasta oo tani ay kordhin karto kordhinta hidda-wadaha template, waxay sidoo kale keeni doontaa dhibka weyneynta aan gaarka ahayn.Markaa, waxyaalahan lagu daro waxay si fiican ugu shaqeeyaan falcelinta PCR-hooseeya iyada oo aan qashin lahayn, laakiin si fiican uguma fiicna falcelinta PRC ee aan nadiif ahayn.Faa'iidada kale ee saabuunta aan-ionic ahayn waa yaraynta wasakheynta SDS.Caadi ahaan inta lagu jiro habka soo saarista DNA-da, SDS waxaa la keeni doonaa tallaabada PCR, taas oo si weyn u joojinaysa dhaqdhaqaaqa polymerase.Sidaa darteed, ku darida 0.5% Tween-20 ama Tween-40 falcelinta waxay ka takhalusi kartaa saameynta xun ee SDS.
Betaine_
Betaine waxa ay wanaajin kartaa kordhinta DNA-da iyada oo hoos u dhigaysa samaynta qaab-dhismeedka labaad oo guud ahaan waa “qarsoodi” ku-darka xirmooyinka PCR-ga ee ganacsiga.Haddii aad rabto inaad isticmaasho betaine, waa inaad gelisaa betaine ama betaine mono-hydrate (Betaine ama Betaine mono-hydrate), laakiin maaha betaine hydrochloride (Betaine HCl), la qabso fiirsiga ugu dambeeya ee 1-1.7M.Betaine waxay sidoo kale gacan ka geysan kartaa hagaajinta gaarnimada sababtoo ah waxay meesha ka saartaa ku tiirsanaanta lammaanaha aasaasiga ah ee dhalaalidda DNA/denaturation DNA.
Waxyaalaha lagu daro si loo yareeyo horu-marinta aan gaarka ahayn
Formamide
Formamide waa wax lagu daro PCR caadi ahaan loo isticmaalo.Waxay isku dari kartaa jeexdin weyn iyo jeexdin yar oo DNA ah, taas oo yaraynaysa xasiloonida sayidkii DNA-da helix laba jibaaran waxayna hoos u dhigtaa heerkulka dhalaalka DNA.Isku-duubnaanta foramide ee loo isticmaalo tijaabooyinka PCR inta badan waa 1%-5%.
Tetramethylammonium chloride( TMAC)
Tetramethylammonium chloride waxay kordhin kartaa gaar ahaan isku-dhafka (gaar ahaan isku-dhafka) waxayna kordhin kartaa heerkulka dhalaalka DNA-da.Markaa, TMAC waxay meesha ka saari kartaa horudhac aan gaar ahayn waxayna yaraynaysaa ku-xidhnaanta DNA-da iyo RNA.Haddii aad isticmaashoasal-xumofalcelinta PCR, xasuuso inaad ku darto TMAC, kaas oo inta badan loo isticmaalo fiirsashada 15-100mM.
Waxyaabaha kale ee Caadiga ah
Marka lagu daro labada qaybood ee daroogooyinka kor ku xusan, waxaa jira waxyaabo badan oo lagu daro oo caadi ah oo ku jira falcelinta PCR, inkastoo ay leeyihiin hawlo kala duwan, waxay sidoo kale yihiin kuwo aad muhiim u ah.
Magnesium ion
Magnesium ion waa isku-xidhaha lama huraanka ah (cofactor) ee polymerase, taas oo ah in la yiraahdo, iyada oo aan lahayn magnesium ion, polymerase waa mid aan shaqayn.Si kastaba ha noqotee, ion magnesium aad u badan ayaa sidoo kale saameyn kara waxtarka polymerase.Isku-duubnaanta ions magnesium ee fal-celin kasta oo PCR ah way kala duwanaan doontaa.Waxyaalaha khiyaanada (sida EDTA ama citrate), fiirsashada dNTP-yada iyo borotiinada dhamaantood waxay saameeyaan uruurinta ion magnesium.Markaa, haddii aad dhibaato kala kulanto tijaabada PCR-gaaga, waxaad isku dayi kartaa inaad bedesho uruurinta ion magnesium ee kala duwan, tusaale ahaan, min 1.0 ilaa 4.0mM, iyada oo u dhaxaysa 0.5-1mM.
Waxaa xusid mudan in wareegyo badan oo baraf-dhalaalaya ay u horseedi karaan kala-saarid-fiirsashada xalka chloride magnesium.Sidaa darteed, waa inaad si buuxda u milmaan ka hor isticmaal kasta, oo si fiican u qas ka hor intaadan isticmaalin.
Serum albumin(Bovine albumin, BSA)
Tijaabooyin kimistari molecular, albumin serum bovine waa wax aad u badan oo lagu daro, gaar ahaan xaddidaadda dheefshiidka enzyme iyo tijaabooyinka PCR.Dareen-celinta PCR, BSA waxay ku caawinaysaa yaraynta wasakhooyinka sida xeryahooda phenolic.Waxa kale oo la sheegay in ay yarayn karto ku-dhejinta fal-celiyeyaasha gidaarka tuubada tijaabada.Dareen-celinta PCR, inta badan xoogga BSA ee lagu daray waxay gaari kartaa 0.8 mg/ml.
 
Alaabooyinka La Xiriira:
Halyeyga PCR(midab leh)
Halyeyga PCR


Waqtiga boostada: Febraayo-10-2023