Talooyin lagu hagaajinayo soo kabashada xabagta

1. Kordhi culeyska muunada inta lagu jiro electrophoresis.

2. Isticmaal koronto-dhaliye cusub oo la diyaariyey.

3. Markaad goyso xabagta, isku day inaad gooyso xabagta oo keliya si aad u yareyso mugga goynta xabagta: uma baahnid koollo leh jajabyo ujeedo yar, haddii kale waxay saameyn doontaa heerka soo kabashada.

4. Ka dib markaad dhalaaliso laba ama in ka badan oo xabag ah, isticmaal tuubo si kasta oo uu mugga weyn yahay oo u gudbi isla tiirkii.

5. Xalka lagu daro sol wuxuu noqon karaa wax yar oo dheeraad ah, kaas oo aad ugu habboon in lagu xiro DNA-da xuubka, laakiin guud ahaan kama badna 750ul.

6. Furaha soo kabashada jel waa in lagu xiro DNA-da tiirka iyada oo loo marayo xoojinta milixda, acidity (lacag) iyo hydrophobicity ee xalka tiirka.Sidaa darteed, haddii pH ee kaydiyaha electrophoresis uu aad u sarreeyo, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) ayaa lagu dari karaa sol;si ay si fiican u dhexgalaan molecules DNA-ga ee xuubka, 30% isopropanol ayaa lagu dari karaa kulaylka dareeraha ka dib marka la miliyo xabagta.

7. Kahor intaadan ku darin eluent, ka tag tiirka heerkulka qolka dhowr daqiiqadood (qiyaastii 10 daqiiqo) si aad si buuxda u uumi-baxdo ethanol-ka.

8. Ugu dambayntii, ku dar ilfog yar si loo yareeyo mugga soo kabashada.Guud ahaan, 30-50μl eluent waxaa loo isticmaalaa elution (ma aha mid aad u yar, haddii kale ma awoodi doonto in ay qoyaan xuubka, taas oo aan ku haboonayn ellition);Dhibcaha elution waxay ku yaalaan bartamaha xuubka, si ay si buuxda u daboolaan DNA-da ku xiran xuubka.

9. Ka dib marka lagu daro eluent, waxaa lagu dhejin karaa qubeyska biyaha 55 digrii 5 daqiiqo ama waxaa lagu dhejin karaa qubeyska 50 in ka badan 10 daqiiqo, ama waxaa lagu xiraa parafilm 4 darajo habeenkii, ka dibna sentrifud si loo soo kabsado maalinta xigta, saameyntu waa wanaagsan tahay.

10.Ku dar xariifka dhexe ee dib ugu celi tiirarka xayeysiinta oo mar labaad sentrifuge.

Hababka iyo hababka faahfaahsan ee soo kabashada alaabta PCR

1. Dib u warshadaynta caagga caadiga ah

Haddii aad rabto inaad soo kabsato xabagta, waxaa fiican inaad isticmaasho qalab, kaas oo ku habboon oo leh wax yar oo ka soo kabasho ah.Haddii aad runtii u baahan tahay inaad gacanta ku soo kabsato, waxaad ku dari kartaa 3 jeer mugga TE ka dib markaad goyso xabagta.Ka dib marka lagu dhalaaliyo qubeyska biyaha, phenol, phenol/chloroform ayaa laga soo saaraa si nadiif ah, ethanol waa soo degdegay.Waa kaas.

2. DNA-da oo ka soo kabanaya jeelyada dhibicda dhalaalka hooseeya

Nadiifinta jajabyada DNA-ga Ku dar TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) oo le'eg mugga jelka, oo ku rid qubeyska 65°C ilaa 5 daqiiqo si uu jelka gebi ahaanba u milmo.

Ka dib markii la keenay heerkulka qolka, qadar siman oo phenol ah (oo ay ku buuxsantay TE, TE ayaa lagu xiray lakabka sare, iyo lakabka hoose ee phenol ayaa laga saaray) ayaa lagu daray, isku dar ah ayaa si tartiib ah loo qasay (wax isku dhafan looma baahna), waxaana lagu qiyaasaa 12,000 rpm 3 daqiiqo.Ku celi 1-2 jeer.

Qaado ka sarreeya, ku dar 0.1 mugga 3mol/L sodium acetate (pH 5.2) iyo 2.5 jeer mugga ethanol dhammaystiran si loo sameeyo roobab ethanol ah.Ku milmi DNA-da la safeeyey oo leh qadar habboon oo TE ah, cabbir waxa ku jira, una diyaari isticmaalka (waxaa loo isticmaali karaa falanqaynta qaab-dhismeedka hidda-wadaha, diyaarinta baaritaanka, iwm.).

3. Soo kabashada PCR oo leh qeexitaan dheeri ah oo wanaagsan

Haddii sifaynta PCR-weynaynta ay wanaagsan tahay, waa nadiifinta fudud iyo soo kabashada alaabta PCR.Waxaad ku dari kartaa 50ug/ml proteinase K alaabta PCR, 37 darajo 1h, la soosaar hal mar phenol/chloroform, hal mar la soosaar chloroform, oo ku dar 0.1 mugga sare ee sare.Sodium acetate waxaa lagu soo celiyay roobab leh 2.5 mugga ethanol dhammaystiran.

Alaabta la xidhiidha:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/