Taasi waxay leedahay dabeecad togan oo horumarsan danaha macaamiisha, ururkayagu si joogto ah u wanaajisaa tayada alaabtayada si ay u qanciso dalabaadka dukaamada iyo dheeraad ah diiradda saarayaa ammaanka, isku halaynta, deegaanka qeexidda, iyo hal-abuurnimo ee Warshada Supply China Ku habboon iyo Quick Rt-PCR Dspathtm 4X Hal-Tallaabo Multiplex Master Mix, Our khibrad adag shaqada xoog si buuxda u taageero laga yaabaa in aad si daacad ah.Waxaan si kal iyo laab ah kuugu soo dhawaynaynaa inaad si dhab ah u joojiso websaydkayaga iyo shirkaddayada oo aad noogu soo dirto su'aashaada.
Taas oo leh dabeecad togan oo horumarsan danaha macmiilka, ururkayagu wuxuu si joogto ah u wanaajiyaa tayada alaabadayada si uu u qanciyo dalabaadka dukaamaysiga oo uu diirada saaro badbaadada, isku halaynta, qeexida deegaanka, iyo hal-abuurnimadaShiinaha Taq DNA Polymerase, Qpcr, Waxaan hadda haysanaa xalalka ugu fiican iyo iibka xirfadlaha ah iyo kooxda farsamada. Iyadoo horumarinta shirkadeena, waxaan awoodnaa inaan siino macaamiisha alaabta ugu fiican, taageero farsamo oo wanaagsan, adeegga iibka ka dib.

Sharaxaada

Xirmadani waxay adeegsataa nidaam u gaar ah oo lysis ah oo si dhakhso ah uga sii deyn kara RNA muunadaha unugyada dhaqameed ee falcelinta RT-qPCR, taas oo meesha ka saaraysa habka nadiifinta RNA waqti-qaadka iyo shaqada badan.Qaabka RNA waxa lagu heli karaa 7 daqiiqo oo kaliya.5× Toos ah RT Mix iyo 2× Toos ah qPCR Mix-SYBR reagents ay bixiso qalabku waxay si degdeg ah oo wax ku ool ah u heli karaan natiijooyinka PCR ee tirada dhabta ah.

5× Toos ah RT Mix iyo 2×QPCR Mix-SYBR toos ah waxay leeyihiin dulqaad adag oo ka hortag ah, iyo lysate ee shaybaarada waxaa loo isticmaali karaa qaab-dhismeedka RT-qPCR si toos ah.Qalabkani waxa uu ka kooban yahay RNA-ga gaarka ah ee xidhiidhka sare ee Foregene reverse transcriptase, iyo Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂, celiyaha falcelinta, PCR optimizer iyo stabilizer.

Tilmaamaha

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Qaybaha kitka

Tilmaamaha & faa'iidooyinka

■ Fudud oo wax ku ool ah: tignoolajiyada Cell Direct RT, muunadaha RNA waxaa lagu heli karaa 7 daqiiqo oo keliya.

■ Baahida muunada waa yar tahay, maadaama ay yar tahay 10 unug ayaa la tijaabin karaa.

■ Soo saarista sare: waxay si dhakhso ah u ogaan kartaa RNA ee unugyada lagu beeray 384, 96, 24, 12, 6-cells.

■ Tirtiraha DNA-da si dhakhso ah ayuu u saari karaa genome-yada la sii daayay, si weyn ayuu u yareynayaa saameynta natiijooyinka tijaabada dambe.

■ Nidaamka RT iyo qPCR ee la hagaajiyay ayaa ka dhigaya laba-tallaabo dib-u-celinta RT-PCR mid hufan iyo PCR mid gaar ah, oo aad u adkeysi badan ka-hortagga falcelinta RT-qPCR.

Codsiga qalabka

Baaxadda codsiga: unugyada dhaqanka.

- RNA lagu sii daayay muunad lysis: kaliya lagu dabaqi karo qaabka RT-qPCR ee xirmadan.

-Qalabka waxa loo isticmaali karaa ujeedooyinka soo socda: falanqaynta muujinta hidde-sidaha, xaqiijinta saamaynta aamusinta hidde-sidaha ee siRNA, baadhista daroogada, iwm.

Jaantuska

Kaydinta iyo nolosha shelf

Qaybta I ee xirmadan waa in lagu kaydiyaa 4℃;Qaybta II waa in lagu kaydiyaa at -20 ℃.

Foregene Protease Plus II waa in lagu kaydiyaa 4 ℃, ha ku barafaysan -20 ℃.

Reagent 2× Toos ah qPCR Mix-SYBR waa in lagu kaydiyaa -20℃ gudcurka;haddii si joogto ah loo isticmaalo, waxa kale oo lagu kaydin karaa at 4 ℃ kaydinta muddada-gaaban (isticmaal ilaa 10 maalmood gudahood) .Taasi waxay leedahay dabeecad togan iyo horusocod ah danaha macaamiisha, ururkayagu si joogto ah u hagaajinaysaa tayada alaabta our si ay u qanciso baahida dukaamanka iyo dheeraad ah oo diiradda saarayaa ammaanka, isku halaynta, qeexidda deegaanka, iyo hal-abuurka Supply China Ku habboon iyo Quick Rt-PCR D. si kal iyo laab ah ugu hiiliya.Waxaan si kal iyo laab ah kuugu soo dhawaynaynaa inaad si dhab ah u joojiso websaydkayaga iyo shirkaddayada oo aad noogu soo dirto su'aashaada.
Qalabka WarshadaShiinaha Taq DNA Polymerase, Qpcr, Waxaan hadda haysanaa xalalka ugu fiican iyo iibka xirfadlaha ah iyo kooxda farsamada. Iyadoo horumarinta shirkadeena, waxaan awoodnaa inaan siino macaamiisha alaabta ugu fiican, taageero farsamo oo wanaagsan, adeegga iibka ka dib.

Mabaadi'da naqshadaynta aasaasiga ah ee waqtiga dhabta ah PCR

Horudhac Horudhac iyo Horudhac Hordhac ah

PCR-da-waqtiga-dhabta ah, naqshadaynta asaasiga ahi aad bay muhiim u tahay.Furayaasha waxay la xiriiraan gaarnimada iyo hufnaanta kordhinta PCR, waxaana loo qaabayn karaa iyadoo la tixraacayo mabaadi'da soo socota:

Dhererka hore: 18-30bp.

Waxa ku jira GC: 40-60%.

Qiimaha Tm: Software-ka naqshadaynta aasaasiga ah, sida Primer 5, wuxuu ku siin karaa qiimaha Tm ee asaasiga ah.Qiimayaasha Tm ee hore iyo kuwa hoose waa inay ahaadaan kuwa ugu dhow ee suurtogalka ah.Qaaciddada xisaabinta Tm waxa kale oo la isticmaali karaa: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Marka la samaynayo PCR, heerkulka ka hooseeya qiimaha Tm ee aasaasiga ah ee 5 °C ayaa guud ahaan loo doortaa heer kulka soo jiidashada (kordhinta u dhiganta heerkulka xididada ayaa kordhin kara qeexida falcelinta PCR).

Qalabka aasaasiga ah iyo PCR:

Naqshadeynta asaasiga ah ee PCR dhererka alaabada ayaa la door bidaa 100-150bp.

Naqshadeynta aasaasiga ah ee aagga qaab dhismeedka sare ee template waa in laga fogaadaa sida ugu macquulsan.

Ka fogow samaynta 2 ama in ka badan oo saldhigyo dhammaystiran oo u dhexeeya 3′ daraf ee hore-u-socodyada sare iyo kuwa hoose.

Primer 3′ terminal saldhiga kuma jiri karo 3 dheeraad ah oo isku xigta G ama C.

Furayaasha laftoodu ma yeelan karaan dhismayaal is kaaba ah, haddii kale qaab-dhismeedka timaha ayaa la samayn doonaa, oo saamaynaya kor u qaadida PCR.

ATCG waa in loo qaybiyaa sida ugu siman ee suurtogalka ah ee isku xigxiga asaasiga ah, iyo 3′ saldhigga terminal waa in laga fogaadaa sida T.

Lifaaqa 1: Xidhmada kabka qaybta gacanta tooska ah ee RT-qPCR

1.Cell Lysis Solution