Qalabka Tissue Tooska ah ee PCR-UNG (la'aanteed Qalabka Muunalada) borotokoolka
Sharaxaada Qalabka:
Si toos ah u isticmaal lysate nudaha xoolaha qaab qaabaysan oo loogu talagalay kordhinta PCR, iyada oo aan la soo saarin DNA gaar ah, degdeg iyo dareen sare.Waxaa lagu daray UNG nidaamka ka-hortagga wasakheynta si meesha looga saaro waxyaabaha beenta ah.
◮Looma baahna nadiifin waqti-qaadasho iyo qaali ah.
◮Dalabka muunadku wuu yar yahay, kaliya qaado hal abuur.
◮Looma baahna daaweyn gaar ah sida shiidi iyo burburin, qalliinkuna waa sahlan yahay.
◮Nidaamka PCR ee la hagaajiyay wuxuu awood u siinayaa PCR inuu yeesho gaar gaar ah iyo dulqaad adag oo loogu talagalay horjoogayaasha falcelinta PCR.
Sharaxaada
Xirmadani waxay isticmaashaa nidaam u gaar ah si ay si dhakhso ah u sii daayaan DNA-ga genomic ee shaybaarada unugyada xoolaha ee falcelinta PCR, sidaa darteed waxay si gaar ah ugu habboon tahay baaritaanka hidde-sideyaasha baaxadda leh.
Habka looga sii daayo DNA-da genomic ee kaydiyaha lysis waxa lagu dhammeeyaa 10-30 daqiiqo gudahood 65°C.Looma baahna habab kale sida borotiinka iyo ka saarista RNA, iyo raadraaca DNA-da ee la sii daayay waxaa loo isticmaali karaa qaab falcelinta PCR.
2× PCR FududTMMix (UNG) waxay isticmaashaa dUTP halkii ay ka isticmaali lahayd dTTP iyadoo ku saleysan 2×PCR EasyTMIsku qas, oo ku dara UNG enzyme (Uracil-N-glycosylase) kaas oo hoos u dhigi kara template ka kooban dUTP isku mar.Kahor falcelinta PCR-ga, ensaymka UNG waxaa loo isticmaalaa hoos u dhigista alaabta PCR ee ay ku jirto uracil.Enzyme UNG wax saameyn ah kuma yeelan doono qaab-dhismeedka aan ku jirin uracil, si loo hubiyo gaar ahaanta iyo saxnaanta xoojinta iyo ka hortagga suurtagalnimada wasakheynta alaabta PCR inta lagu jiro baaritaanka hidda-socodka ballaaran.
D-Taq DNA polymerase waa DNA polymerase si gaar ah u soo saaray Foregene ee falcelinta PCR tooska ah.D-Taq DNA polymerase waxay leedahay dulqaad xoog leh oo loogu talagalay xakameynta falcelinta PCR ee kala duwan, waxayna si wax ku ool ah u kordhin kartaa tirada DNA-da ee hababka falcelinta kakan ee kala duwan, iyo xawaaruhu wuxuu gaari karaa 2Kb/min, kaas oo si gaar ah ugu habboon falcelinta PCR tooska ah.
Qaybaha kitka
| Qaybta I | Buffer AL |
| Kahortagga Protease | |
| 6× DNA Loading Buffer | |
| Qaybta II | 2× PCR FududTMIsku qas(UNG) |
Tilmaamaha & faa'iidooyinka
■Ma jiro waqti-qaadasho iyo nadiifin DNA qaali ah
■ Baahida muunada waa yar tahay, in yar oo 5mg unug xayawaan ah ayaa la tijaabin karaa.
■ Looma baahna daaweyn gaar ah sida shiidi iyo burburin, qalliinkuna waa sahlan yahay.
■ Nidaamka PCR ee la hagaajiyay wuxuu ka dhigayaa PCR inay yeeshaan gaar gaar ah oo adag iyo dulqaad xooggan ee ka hortagga falcelinta PCR.
■ Nidaamka PCR-ka-hortagga wasakheynta 2×PCR FududTMIsku-darka (UNG) waxay si wax ku ool ah u baabi'isaa wasakhowga ay keenaan alaabada PCR waxayna hubisaa gaar ahaan iyo saxnaanta kordhinta.
Xuduudaha Kit
Codsiga: noocyo kala duwan oo unugyo xayawaan ah.
DNA-da laga sii daayay muunada lysis: kaliya waxaa loo adeegsaday qaab PCR.
Qalabka waxaa loo isticmaali karaa ujeedooyinka soo socda: aqoonsiga transgenosis, genotyping xayawaanka, iwm.
Socodka shaqada
Kaydinta iyo nolosha shelf
Qaybta I ee xirmadan waa in lagu kaydiyaa 2-8℃.
Reagent Buffer AL waxa lagu kaydin karaa 12 bilood xaaladaha qalalan;waxa lagu kaydin karaa 2-8℃kaydinta dheer.
Reagent Foregene Protease wuxuu leeyahay qaacido gaar ah.Si loo hubiyo dhaqdhaqaaqeeda iyo xasiloonideeda, fadlan ku kaydi 4℃muddo 12 bilood ah.
Reagent 6×Kaydinta DNA-da waxa lagu kaydin karaa 4℃ama -20℃muddo dheer.
Qaybta II ee xirmadan waa in lagu kaydiyaa -20℃.
Reagent 2×PCR FududTMMix(UNG), haddii si joogto ah loo isticmaalo, waxa kale oo lagu kaydin karaa 4℃kaydinta muddada gaaban (ku isticmaal ilaa 10 maalmood gudahood).
