Waxaan si joogto ah u aaminsanahay in mid ka mid ah dabeecadda ayaa go'aamisa tayada alaabta 'sare, faahfaahinta go'aaminta alaabta' tayo sare leh, wada jir ah ula waaqiciga ah, waxtarka leh iyo ruuxa shaqaalaha cusub ee keenista cusub ee Nukliyeer Acid soo saaridda Reagent (Serum / Plasma iyo puncture xal) , Rna Extraction Qalabka Tijaabada, Iyada oo tayada la aqbali karo ganacsi aad u weyn.Waxaan soo dhaweyneynaa rajada cusub iyo kuwii hore ee dhammaan qaybaha nolosha si ay nala soo xiriiraan isdhexgalka ganacsiyada yaryar ee soo socda iyo gaaritaanka guulo wadajir ah!
Waxaan si joogto ah u aaminsanahay in qofka dabeecaddiisu go'aamiso tayada sare ee alaabta, faahfaahinta ayaa go'aamisa tayada tayada sare leh, oo ay weheliso ruuxa shaqaalaha dhabta ah, hufan iyo hal-abuurka lehShiinaha Nucleic Acid Reagent Soo saarista iyo Habka birta birta ah, Badeecadahayadu waxay ku riyaaqeen sumcad aad u wanaagsan tayada wanaagsan, qiimaha tartanka iyo soo dejinta degdega ah ee suuqyada caalamiga ah.Hadda, waxaan si daacad ah u rajeyneynaa inaan la shaqeyno macaamiil badan oo dibadda ah oo ku saleysan faa'iidooyinka wadaagga ah.
Buug-tilmaameedka:Qalabka Go'doominta Dhirta ee lagu daray Buugga Tilmaamaha

Waxaan si joogto ah u aaminsanahay in mid ka mid ah dabeecadda ayaa go'aamisa tayada alaabta 'sare, faahfaahinta go'aaminta alaabta' tayo sare leh, wada jir ah ula waaqiciga ah, waxtarka leh iyo ruuxa shaqaalaha cusub ee keenista cusub ee Nukliyeer Acid soo saaridda Reagent (Serum / Plasma iyo puncture xal) , Rna Extraction Qalabka Tijaabada, Iyada oo tayada la aqbali karo ganacsi aad u weyn.Waxaan soo dhaweyneynaa rajada cusub iyo kuwii hore ee dhammaan qaybaha nolosha si ay nala soo xiriiraan isdhexgalka ganacsiyada yaryar ee soo socda iyo gaaritaanka guulo wadajir ah!
Gaadhsiin Cusub oo loogu talagalayShiinaha Nucleic Acid Reagent Soo saarista iyo Habka birta birta ah, Badeecadahayadu waxay ku riyaaqeen sumcad aad u wanaagsan tayada wanaagsan, qiimaha tartanka iyo soo dejinta degdega ah ee suuqyada caalamiga ah.Hadda, waxaan si daacad ah u rajeyneynaa inaan la shaqeyno macaamiil badan oo dibadda ah oo ku saleysan faa'iidooyinka wadaagga ah.

Tiirka ayaa xidhay

Ka dib marka tiirka la xiro, wax-soo-saarka RNA waa la dhimay ama xitaa suurtagal maaha in la nadiifiyo RNA, iyo tirada RNA ee la helay waa yar tahay.

Falanqaynta sababta caadiga ah:

1. Nasinta muunadku maaha kuwo dhammaystiran.

Jabinta muunadu gabi ahaanba ma keento in DNA-Nadiifinta COLUMN la xidho, iyadoo saamaynaysa wax-soosaarka RNA iyo tayada.Waxaan kugula talineynaa inaad si degdeg ah u shiidiso nitrogen dareere ah oo ku filan markaad jebiso shaybaarada, Isku day inaad burburiso gidaarka muunada, xuubabka unugga iyo unugyada kale.Tusaalooyinka dhirta ee polyol polysaccharides, waxaan kugula talineynaa inaad isticmaasho Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

2. Marka la nuugo saamiga sare ee kala soocan ee tiirka DNA-Nadiifinta, waxa suurtogal ah in daadad jajaban unugyada la nuugo.

Sediments unugyada kala jajaban ee la qaaday waxay keeni doonaan tiirka RNA-KALIYA kaas oo la xannibi doono marka hawlgalka xayeysiinta RNA la sameeyo (eeg tallaabada 6).Waxaan kugula talineynaa si taxadar leh markaad nuugto maaddadan sare si aad uga fogaato burburka unugyada in la nuugo.

3. Tusaalaha qaddarka bilowga ah aad buu u badan yahay.

Isticmaalka muunada xad-dhaafka ah waxay keeni doontaa kala qaybsanaan la'aan ama lysis unug aan dhamaystirnayn oo uu sameeyo Buffer PSL1, taasoo keenta xannibaadda tiirka nadiifinta inta lagu jiro nadiifinta.Qalabka Go'doominta RNA Wadarta Dhirta Mid kasta oo muunad qalliin oo la sifeeyay waa 50 mg.Tusaalooyinka dhirta ee polyol polysaccharides, waxaan kugula talineynaa inaad tijaabiso Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

4. Heerkulka centrifuge aad ayuu u hooseeyaa.

Dhammaan go'doominta RNA iyo habka nadiifinta waxaa lagu fuliyaa heerkulka qolka (20-25°C), marka laga reebo in unugyada muunada ay jebinayaan nitrogen dareere ah. Heerkulka qaar ka mid ah centrifuges cryogenic ayaa ka hooseeya 20℃, kaas oo sababi kara xannibaadda tiirka-Nadiifinta DNA-ga iyo/ama RNA-Only Column.Haddii tani dhacdo, dhig heerkulka centrifuge ilaa 20-25℃iyoHubi in isku darka lysis iyo/ama ka sarreeya ethanol-ka lagu daray ay horay u sii kululeeyeen 37°C.

Ma jiro RNA la soo saaray ama RNA wax soo saarka oo hooseeya

Caadi ahaan waxaa jira arrimo badan oo saameeya waxtarka soo kabashada, sida: muunadda RNA nuxurka, habka hawlgalka, mugga elution, iwm.

Falanqaynta sababaha caadiga ah sida soo socota:

1.Baraf baraf ama heerkul hooseeya (4°C) centrifugation ayaa la sameeyay intii lagu jiray qaliinka.

Soo jeedin: Ku shaqee heerkulka qolka (15-25°C) habka oo dhan, ha samayn baraf qubeyska iyo heerkulka hoose ee centrifugation.

2. RNA ayaa hoos u dhacday sababtoo ah ilaalinta aan habboonayn ee muunada ama ilaalinta muddada dheer ee muunada.

Talo-soo-jeedin: Saamballada cusub ee la ururiyey waa in si degdeg ah loogu barafoobay nitrogen dareere ah, ka dibna lagu kaydiyaa -80 ° C muddo dheer, iska ilaali qaboojinta soo noqnoqda iyo dhalaalidda shaybaarada;ama isla markiiba muunada ku qooy RNA stabilizer RNAlater solution (muunada xoolaha).

3. Kala qaybsanaanta muunada oo aan ku filnayn iyo lysis waxay keenaysaa xannibaadda tiirka sifaynta.

Talo-soo-jeedin: Markaad shiidayso nudaha, fadlan hubi in unuggu si ku filan dhulka u dhigay, oo si degdeg ah ugu wareeji Buffer PSL1 ee horay loo sii diyaariyey (xaqiiji in saamiga saxda ah ee β-ME lagu daray, eeg tallaabada 1 ee habraaca).

4.Eleent waxaa lagu daray si qaldan.

Soo jeedin: Hubi in RNase-free ddH2O lagu daadanayo badhtamaha xuubka tiirka sifaynta.

5.Mugga saxda ah ee ethanol buuxa laguma darin Buffer PSL2 ama Buffer PRW2.

Soo jeedin: Fadlan raac tilmaamaha, ku dar mugga saxda ah ee ethanol ee saxda ah Buffer PSL2 iyo Buffer PRW2 oo si fiican isku qas ka hor inta aan qalabka la isticmaalin.

6. Qadarka saamiga unuggu waa mid aan habboonayn.

Soo jeedin: Isticmaal 50 mg oo unug ah 500 μl ee Buffer PSL1.Isticmaalka unug aad u badan waxay yaraynaysaa cadadka RNA ee la soo saaray iyo nadiifinta RNA ka soo baxdana waa la dhimi doonaa.Waxaan si adag ugu talinaynaa in qiyaasta muunada bilowga ah aysan ka badnayn 50 mg halkii qalliinka soo saarista RNA.

7.Mugga sare-u-qaadista oo aan habboonayn ama aan dhammaystirnayn.

Soo jeedin: Mugga sare ee tiirka nadiifinta waa 50-200 μl;Haddii saamaynta sare-u-qaadista aysan ku qanacsanayn, waxaa lagu talinayaa in lagu kordhiyo waqtiga heerkulka qolka ka dib marka lagu daro RNase-Free ddH2O preheated, sida 5-10min.

8.Tiirka sifaynta ayaa leh haraaga ethanol ka dib markii lagu dhaqo BufferPRW2.

Talo soo jeedin: Haddii tuubada madhan la centrifused 1 daqiiqo oo ay weli jiraan ethanol ka dib markii lagu dhaqo Buffer PRW2, waxaad kordhin kartaa wakhtiga centrifugation tuubada madhan ilaa 2 min, ama dhig tiirka sifaynta heerkulka qolka 5 min si buuxda u saaro ethanol hadhaaga ah.

9.Qalabka waxa loo isticmaalay si khaldan.

Soo jeedin: Muunada dhirta ee polysaccharides polyphenolic, adeegsiga xirmooyinka caadiga ah sida Qalabka Go'doominta RNA ee Wadarta Guud waxaa laga yaabaa inaysan awoodin inay helaan muunado RNA ku habboon.Waxaan kugula talineynaa inaad isticmaasho Plant Total RNA IsolationKit Plus, kaas oo si gaar ah loogu talagalay shaybaarada dhirta polyphenolic polysaccharide.Xirmad si gaar ah loogu soo saaray RNA laga soo saarayo shaybaarada dhirta polyphenol iyo polysaccharide.

Qiimaha OD260/OD280 wuu hooseeyaa

Elution RNA leh ddH2O oo loo isticmaalo akhrinta spectrophotometer-ka natiijooyinka OD260/OD280 hooseWaxaan kugula talineynaa inaad isticmaasho 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (halkii RNase-Free ddH2O si aad u iftiimiso RNA) si aad u hesho OD260/OD280 qiyamka saxda ah, eeg "Qiimaynta Xogta iyo Nadiifinta RNA" ee bogga 19.

RNA-da la safeeyey ayaa hoos u dhacay

Tayada RNA la safeeyey waxay la xiriirtaa arrimo ay ka mid yihiin ilaalinta muunada, faddaraynta RNase, iyo wax-is-daba marin.

Falanqaynta sababaha caadiga ah:

1. Tissue samples lama kaydin waqti ka dib ururinta.

Talo soo jeedin: Haddii shaybaarka unugyada aan la isticmaalin waqti ka dib ururinta, fadlan ku kaydi nitrogen dareere ah heerkul hoose isla markiiba ama u wareeji -80 ° C kaydinta muddada dheer ka dib marka si degdeg ah loo qaboojiyo nitrogen dareeraha ah, ama isla markiiba muunadaha ku dhex geli RNA stabilizer RNAlater xal (muunada xoolaha).Soo saarista RNA, isku day inaad isticmaasho muunado unug oo dhowaan la ururiyey.

2.Baraf soo noqnoqda iyo dhalaalida shaybaarada nudaha.

Talo soo jeedin: Marka la kaydinayo shaybaarka nudaha, waxa fiican in la googooyo qaybo yaryar si loo ilaaliyo, oo qayb iyaga ka mid ah ka soo saar marka la isticmaalayo si looga fogaado xaalufka RNA ee ay keento baraf soo noqnoqda iyo dhalaalidda shaybaarada.

3.RNase waxa lagu soo bandhigaa qolka qalliinka ama aan la xidhin galoofyada la tuuri karo, waji-xidhka, iwm.

Talo soo jeedin: Tijaabada soo saarista RNA waxa si fiican loogu sameeyaa hawlgalo kala duwan oo RNA ah, miiska shaybaadhkana waa in la nadiifiyaa ka hor tijaabada, waana in la xidho galoofyada iyo maaskaro la tuuri karo inta tijaabada lagu jiro si looga fogaado hoos u dhaca RNA ee ay keento soo bandhigida RNase ilaa xadka ugu badan.

4. Reagent-ku waxa ku wasakhoobay RNase marka la isticmaalayo.

Soo jeedin: Ku beddel taxane cusub oo ah wadarta guud ee xirmooyinka soo saarista RNA ee tijaabooyinka la xiriira.

5. Tuubooyinka centrifuge iyo talooyinka pipette ee loo isticmaalo wax-ka-beddelka RNA waxay ku wasakhoobeen RNase.

Talo soo jeedin: Hubi in tuubooyinka centrifuge, talooyinka pipette, pipettes, iwm. ee loo isticmaalo soo saarista RNA ay dhamaantood yihiin kuwo ka xor ah RNase.

Buug-tilmaameedka:

Qalabka Go'doominta Dhirta ee lagu daray Buugga Tilmaamaha