Qalabka Go'doominta ee Kaarka FTA ee Kaarka DNA-ga Soosaarida ama Xirmada Sifaynta
Sharaxaada Qalabka:
Si dhakhso leh uga nadiifi DNA-ga genomiga tayada sare leh ee swab buccal/Samballada Kaarka FTA
◮Wax wasakhaysan RNase ma jiro:Tiirka-DNA-Kaliya ee ay bixiso qalabku waxa uu suurtogal ka dhigayaa in RNA laga saaro DNA-da genomic iyada oo aan lagu darin RNase inta lagu jiro tijaabada, iyada oo ka hortagaysa shaybaarka in uu wasakheeyo RNase dibadda ah.
◮Xawaaraha dheereeya:Foregene Protease wuxuu leeyahay dhaqdhaqaaq ka sarreeya borotiinka la midka ah, wuxuuna si dhakhso ah u dheefshiidaa shaybaarada unugyada;Qalliinku waa sahlan yahay, waxaana hawlgalka soo saarista DNA-ga genomic lagu dhamayn karaa 20-80 daqiiqo gudahood.
◮Ku habboon:Centrifugation-ka waxaa lagu sameeyaa heerkulka qolka, mana jirto baahi heerkul hoose oo 4°C ah ama roobka ethanol ee DNA.
◮Badbaadada:Looma baahna soo saarista reagent organic.
◮Tayada sareDNA-da genomic ee la soo saaray ayaa leh jajabyo waaweyn, ma jiro RNA, ma jiro RNase, iyo maadada ion oo aad u hooseeya, taas oo buuxin karta shuruudaha tijaabooyin kala duwan.
◮Nidaamka Micro-elution:Waxay kordhin kartaa diiradda DNA-da genomic, taas oo ku habboon ogaanshaha hoose ama tijaabinta.
Sharaxaada
Qalabkani waxa uu bixiyaa hab wax ku ool ah oo degdeg ah si aad u hesho DNA-ga genomic-fiirsashada sare ee swabs buccal iyo Kaarka FTA (dhibcaha dhiigga).Isticmaalka shirkadeena's DNA-kaliya xuubka silica laf-dhabarta tiirka iyo caanaha, oo lagu daray Foregene Protease, diirad-saar sare, DNA genomic tayo sare leh ayaa lagu soo saari karaa 80 daqiiqo gudahood.Tiirka nadiifinta yar ee sida gaarka ah loo nashqadeeyay waxa uu xidhaa DNA-da genomic, DNA-da waxa lagu soo saari karaa qadar yar (15μl) nidaamka elution si loo kordhiyo diiradda DNA-ga genomic ee la helay, taas oo ku habboon ogaanshaha hoose ama tijaabada.Qalabku wuxuu farsamayn karaa hal ama dhawr muunado markiiba, habka sifaynta uma baahna soo saarista walxaha dabiiciga ah sida phenol, chloroform, iyo isopropanol ama ethanol waqti-qaadka ah, qalliinkuna waa mid fudud oo wakhti badbaadiya.
Tilmaamaha
50 diyaarin
Qaybaha kitka
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Acrylamide toosan |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Kahortagga Protease |
| Tiirka-Kaliya DNA |
| Tilmaamaha |
Tilmaamaha & faa'iidooyinka
-Ma jirto faddarayn RNase: Tiirka DNA-kaliya ee ay bixiso qalabku waxa uu suurtogal ka dhigayaa in RNA laga saaro DNA-da genomic iyada oo aan lagu darin RNase inta lagu jiro tijaabada, iyada oo laga fogaanayo shaybaarka in uu wasakheeyo RNase dibadda ah.
Xawaaraha degdega ah: Foregene Protease wuxuu leeyahay waxqabad ka sarreeya borotiinka la midka ah, wuxuu si dhakhso ah u dheefshiidaa shaybaarada;hawlgal fudud.
-Ku haboon: Centrifugation-ka waxaa lagu sameeyaa heerkulka qolka, mana jirto baahi loo qabo 4°C heerkulka hoose ee centrifugation ama roobab ethanol ee DNA.
-Badbaadada: Soo saarista reagents organic looma baahna.
-Tayada sare: DNA-da genomic ee la soo saaray ayaa leh jajabyo waaweyn, ma jiro RNA, aan lahayn RNase, iyo maadada ion oo aad u hooseeya, taas oo buuxin karta shuruudaha tijaabooyin kala duwan.
-Nidaamka Micro-elution: Waxa ay kordhin kartaa fiirsashada DNA-da genomic, taas oo ku habboon in la ogaado ama la tijaabiyo hoose.
Codsiga qalabka
Waxay ku habboon tahay sifaynta DNA-da genomic ee shaybaarrada soo socda: swabs buccal, Kaarka FTA (dhibcaha dhiigga).
Kaydinta iyo nolosha shelf
-Qalabkan waxa lagu kaydin karaa 12 bilood xaaladaha qalalan ee heerkulka qolka (15-25°C);Haddii loo baahdo in lagu kaydiyo wakhti dheer, waxa lagu kaydin karaa 2-8 ° C.
Fiiro gaar ah: Haddii lagu kaydiyo heerkul hooseeya, xalku wuxuu u nugul yahay roobab.Kahor intaan la isticmaalin, hubso inaad geliso xalka qalabka heerkulka qolka muddo wakhti ah.Haddii loo baahdo, ku sii kululee biyaha qubeyska 37°C 10 daqiiqo si aad u milanto daadka, oo ku qas kahor isticmaalka.
-Xalka Foregene Protease wuxuu leeyahay qaacido gaar ah, kaas oo firfircoon marka lagu kaydiyo heerkulka qolka muddo dheer (3 bilood);Dhaqdhaqaaqiisa iyo xasiloonida ayaa fiicnaan doona marka lagu kaydiyo 4 ° C, sidaas darteed waxaa lagu talinayaa in lagu kaydiyo 4 ° C, xusuusnow inaadan ku haynin -20 ° C.
Tiirka sifaynta ayaa xidhan
Qalabkan, hawlgalka soo saarista DNA-da genomic, tiirka sifaynta ayaa si toos ah loogu dhejiyaa muunadda lysis ee isku-darka enzymatic iyada oo aan la qaadin tallaabo centrifugation, iyo tiirka nadiifinta ayaa laga yaabaa in la xannibo sababtoo ah enzymization aan dhamaystirnayn iyo viscosity sare ee muunadda.
Sababaha suurtagalka ah ee soo socda waa sida soo socota:
1. Dheefshiidka enzymatic oo aan dhamaystirnayn ee shaybaarada unugyada.
Talo-soo-jeedin: Wakhtiga habaynta muunadda ee Foregene Protease si habboon ayaa loo dheerayn karaa ama ka sarreeya waxa la qaadan karaa ka dib centrifugation at 12,000 rpm (~ 13,400 × g) 5 min.
2. Isticmaalka xad dhaafka ah ee shaybaarada unugyada ama unugyo waaweyn.
Talo-soo-jeedin: Way fiican tahay inaadan dhaafin 1 buccal suuf ee muunada;haddii muunadku aad u weyn yahay, kordhi qiyaasta Buffer ST1, Foregene Protease, kaydinta ST2 si waafaqsan.
3. Mawduuca muunada oo aad u sarreeya.
Talo soo jeedin: Muundooyinka waxaa si habboon loogu qasi karaa 10 mM ee Tris-HCl ka hor inta aan la soo saarin DNA-da genomic.
4. Jajabka kaadhka dhiigga oo la nuugay.
Talo soo jeedin: Waqtiga dhexe ee ku meel gaadhka ah ee tallaabada 6 ee dhibicda dhiigga (FTA Card) soo saarista genomic ayaa si habboon loo kordhin karaa.
Waxsoosaar hooseeya ama DNA-da oo aan lahayn
Inta badan waxaa jira arrimo kala duwan oo saameeya dhalidda DNA-ga, oo ay ku jiraan asalka muunada, xaaladaha kaydinta muunada, diyaarinta muunada, wax-is-dabamarinta, iwm.
DNA-da genomic lama heli karo marka la soo saarayo
Sababaha suurtagalka ah waa sida soo socota:
1. Ilaalinta aan habboonayn ee shaybaarada ama kaydinta wakhti dheer waxay keenaysaa hoos u dhaca DNA-da.
Talo soo jeedin: Suugaanta afka waa in la door bidaa in si cusub loo muunadeeyo, lagumana talinayo in la isticmaalo suufyada la ilaaliyo ee hawlaha soo saarista DNA-da;shaybaarrada dhibcaha dhiigga waa in ay xaqiijiyaan in tayadu ay tahay mid u qalanta oo wakhtiga kaydinta aanu noqon mid aad u dheer.
2. Isticmaalka nudaha oo aad u yar waxay keeni kartaa in aan la soo saarin DNA-da genomic ee u dhiganta.
Talo soo jeedin: Raac tilmaamaha muunadda suufka buccal ee hagaha hawlgalka, oo masax inta jeer ee suurtogalka ah si unugyo ku filan loogu dhejiyo suufka afka laga soo saaro DNA-da genomic;Soo saarista saamiga dhiigga, meesha gooynta dhibicda dhiigga ayaa si habboon loo kordhin karaa.
3. Protease Foregene si aan munaasib ahayn ayaa loo ilaaliyaa, taasoo keenta hoos u dhac ku yimaada dhaqdhaqaaqiisa ama hawlgelin la'aan.
Talo soo jeedin: Xaqiiji xaaladaha kaydinta ee Protease Foregene ama ku beddel Foregene Protease cusub ee falcelinta enzymatic.
4. Ilaalinta aan saxda ahayn ee xirmada ama wakhtiga kaydinta ayaa aad u dheer, taasoo keentay fashilka qaybaha qaar ee xirmada.
Talo-soo-jeedin: Iibso xirmo go'doomin DNA suuf Buccal cusub oo loogu talagalay nidaamyada la xiriira.
5. Buffer WB kuma darto ethanol dhammaystiran.
Talo soo jeedin: Xaqiiji in kaydiyaha WB uu ku darayo mugga saxda ah ee ethanol dhammaystiran.
6. Eluent si sax ah looguma darin filimka silikoon.
Talo soo jeedin: Ku dar 65 °C dhibciyo eluent horay u diiray oo ku jira bartamaha xuubka silikoonka oo ka tag heerkulka qolka 5 min si loo kordhiyo waxtarka sare.
DNA-ga genomiga wax-soo-saar-hoose ayaa go'doonsan
Sababaha suurtagalka ah ee soo socda waa sida soo socota:
1. Ilaalinta aan habboonayn ee shaybaarada ama kaydinta wakhti dheer waxay keenaysaa hoos u dhaca DNA-da.
Talo-soo-jeedin: Suuxdin afka laga qaato ayaa la door bidaa in mar cusub laga qaaday muunad, suufka la xafidayna waa inaan loo isticmaalin soo saarista DNA-da genomic.
2. Haddii xadiga muunada unuggu aad u yar yahay, waxa ku jira DNA-ga genomiga ah ee la soo saaray wuu yaraan doonaa.
Talo soo jeedin: Raac tilmaamaha muunadda suufka afka ee ku jira hagaha qalliinka, adigoo masaxaya inta jeer ee suurtogalka ah si unugyo ku filan loogu dhejiyo suufka afka laga soo saaro DNA-da genomic.
3. Protease Foregene si aan munaasib ahayn ayaa loo ilaaliyaa, taasoo keenta hoos u dhac ku yimaada dhaqdhaqaaqiisa ama hawlgelin la'aan.
Talo soo jeedin: Xaqiiji xaaladaha kaydinta ee Protease Foregene ama ku beddel Foregene Protease cusub ee falcelinta enzymatic.
4. Dhibaatooyin aan caadi ahayn.
Talo soo jeedin: Isticmaal Buffer EB si aad u iftiimiso;haddii aad isticmaalayso ddH2O ama kuwa kale, xaqiiji in pH ee eluate-ku uu u dhaxeeyo 7.0-8.5.
5. Eluate si sax ah looguma darin hoos u dhaca.
Talo soo jeedin: Ku dar dhibco eluent badhtamaha xuubka silikoonka oo ku dhaaf heerkulka qolka 5 min si loo kordhiyo waxtarka elution.
6. Dareeraha elation ayaa urura wax aad u yar.
Talo-soo-jeedin: U isticmaal eluent ee elution DNA genomic sida loogu baahan yahay tilmaamaha, ugu yaraan wax aan ka yarayn 15 μl.
Nadiifin hoose oo DNA-da genomiga ah ayaa go'doonsan
Nadiifinta DNA-da ee hooseeya waxay u horseedi kartaa guuldarro ama natiijooyin aan ku qanacsanayn tijaabooyinka hoose, sida: enzymes lama goyn karo, PCR ma heli karto jajabka hidda-socodka xiisaha, iwm.
Sababaha suurtagalka ah waa sida soo socota:
1. Wasakhowga Heteroprotein, wasakhowga RNA.
Falanqaynta: Tiirka sifaynta laguma maydhin iyadoo la isticmaalayo Buffer PW;tiirka nadiifinta dhaqidda Buffer PW laguma dhaqin iyadoo la isticmaalayo xawaaraha dhexe ee saxda ah.
Talo-soo-jeedin: Hubi in aanay jirin wax roob ah ka hor inta aan lagu darin ethanol;Iska hubi inaad dhaqdo tiirka nadiifinta si waafaqsan tilmaamaha, tallaabadanna lama dhaafi karo.
2. wasakhowga wasakhda wasakhaysan.
Falanqaynta: Buffer WB tiirka nadiifinta ayaa laga saaray ama la dhaqay hal mar oo kaliya, taasoo keentay faddarayn ionic ah.
Talo soo jeedin: Hubi inaad dhaqdo Buffer WB 2 jeer sida lagu faray si aad meesha uga saarto ions haraaga intii suurtogal ah.
3. RNA enzyme wasakhaysan.
Falanqaynta: RNases shisheeye ayaa lagu daray kayd;Qalliinka dhaqidda Buffer PW sax ma ahayn, taasoo keentay hadhaaga RNase, saamaynaya hawlaha tijaabada ah ee RNA-da hoose, sida qoraalka in vitro.
Talo-soo-jeedin: Xirmooyinka go'doominta aashitada nukliyeerka ee taxanaha ah ayaa ka saari kara RNA iyada oo aan lagu darin RNase dheeraad ah.Hubi inaad raacdo tilmaanta Buffer PW tiirka nadiifinta, tallaabadan lama dhaafi karo.
4. Haraaga ethanol.
Falanqaynta: Buffer WB ma samayn centrifugation tube madhan ka dib markii la dhaqay tiirka sifaynta.
Talo soo jeedin: Samee hawlgalka centrifugation tube madhan saxda ah sida ku xusan tilmaamaha.
5. wasakhowga kale ee wasakhaysan.
Falanqaynta: Muunado kaydsan ama muunado gaar ah lama sii daawayn.
Talo soo jeedin: Si fiican ugu sii daawee muunada sida lagu faray.
